丹参、川芎提取物对高脂喂养去卵巢大鼠血脂和骨的作用及机制研究

论文摘要

研究目的与意义心血管疾病（Cardiovascular diseases，CVD）和骨质疏松症（Osteoporosis，OP）都是常见的慢性病，在老年人中发病率和死亡率非常高。越来越多的证据显示这两种疾病之间存在着很多病理生理的联系。绝经后妇女性激素（主要指雌激素和孕激素）缺乏，容易并发心血管疾病和骨质疏松症，因此常常采用以雌/孕激素为主的激素替代疗法。这种疗法对两种疾病确实表现出一定的治疗效果，但是其副作用比较大。本课题从副作用小的活血化瘀类中药入手，分别选取具有植物雌激素样的丹参和植物孕激素样的川芎为研究对象，采用高脂饮食喂养的去卵巢大鼠模拟绝经后妇女并发心血管疾病和骨质疏松症模型，首次观察两药分别对CVD和OP相关组织和器官的影响情况，旨在两病并行治疗，既可以减少病人的痛苦，又可以减轻病人和社会的经济负担，同时可以为揭示心血管疾病和骨质疏松症的内在联系提供一定的理论依据。研究方法与结果（1）丹参和川芎分别采用传统的水提取和80%乙醇提取的方法提取，其得率分别为13.04%和17.08%；而后HPLC方法分析显示丹参水提物中含有13.93±0.10%的丹酚酸B和0.20±0.03%的丹参素，川芎醇提物中含4.76±0.25%的阿魏酸和3.00±0.16%的川芎嗪。（2）49只6月龄SD大鼠按体重随机分成7个组：假手术（Sham）+低脂饮食（low fat control diet, LFD）+Vehicle组、Sham+高脂喂食（high fat diet, HFD）+Vehicle组、去卵巢（OVX）+LFD+Vehicle组、OVX+HFD+Vehicle组、OVX+HFD+17β-雌二醇（17β-estradiol，E2，1mg/kg/d, PO）组、OVX+HFD+丹参水提物（600mg/kg/d, PO）组、OVX+HFD+川芎醇提物（600mg/kg/d, PO）组，每组7只，分别采用不同饮食和药物治疗12周。结果显示，HFD和OVX能明显增加大鼠的体重，降低肝脏、肾脏及脾脏的指数；E2、丹参水提物和川芎醇提物分别治疗高脂喂养的去卵巢大鼠12周后，能明显降低大鼠的体重，增加肝脏、肾脏和脾脏的指数。（3）心血管疾病的相关指标主要检测血脂水平、肝脏的病理学变化、肝脏的脂肪含量、抗氧化活性、血管的活性。结果显示，HFD和OVX能明显诱导血脂水平异常、肝脏脂肪变性、抗氧化活性降低、血管内皮损伤。丹参水提物和川芎醇提物都能像E2一样，既能降低高脂饮食喂养的去卵巢大鼠血清TG、TC和LDL-c水平，降低血清ALT和AST活性，减少肝脏的脂肪含量，减少肝脏氧化分子MDA水平，增加抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px活性，上调肝脏LDLR和CYP7A1的mRNA和蛋白表达水平，下调肝脏HMGCR水平；还能增加血管对Ach诱导的内皮依赖的血管收缩活力，增加eNOS诱导的NO的产生，下调血管炎症分子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1的mRNA水平。（4）骨质疏松症的相关指标主要检测血清和尿液Ca和P的浓度变化，micro-CT分析松质骨（胫骨近端和第二腰椎）和皮质骨（胫骨中段和股骨中段）骨密度和骨显微结构的变化。结果显示HFD和OVX能明显诱导尿钙的渗出增加，诱导松质骨BMD降低，加剧骨显微结构改变；尽管E2、丹参水提物和川芎醇提物都能降低高脂饮食喂养的去卵巢大鼠尿Ca的渗出，增加松质骨BMD和Tb.N，降低Tb. Sp、DA和SM，诱导骨小梁由杆状向板状转变，但是它们对不同的松质骨影响不同，丹参水提物主要是影响胫骨近端的骨显微结构，川芎醇提物影响的主要是第二腰椎，而E2对两种松质骨都有明显的影响。（5）MTS法和碱性磷酸酶活性检测法进一步检测两种提取物对大鼠类成骨细胞UMR106增殖和分化的影响，结果首次发现丹参水提物只能促进UMR106细胞分化，而不影响细胞增殖；川芎醇提物既能刺激细胞分化，又能促进细胞增殖。结论（1）HFD和OVX能增加大鼠体重，改变血脂水平，损伤血管和肝脏，诱导尿钙渗出、降低松质骨骨密度、改变骨显微结构，表明模拟绝经后妇女CVD和OP并发的模型建立成功。（2）丹参水提物和川芎醇提物首次在高脂饮食喂养的去卵巢大鼠中既表现出抗CVD的效果，又表现出抗OP的作用，达到了两病同治的目的。（3）尽管体内外实验首次证实丹参水提物和川芎醇提物对不同松质骨和类成骨细胞表现出不完全相同的影响，但它们都能促进成骨细胞分化，防止骨丢失，可能成为预防和治疗绝经后妇女骨质疏松症的新型候选药物。

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摘要

ABSTRACT

主要缩写表

第一章绪论

1.1 引言

1.2 绝经后妇女的生理和病理变化

1.3 心血管疾病和骨质疏松症

1.3.1 心血管疾病和骨质疏松症的关系

1.3.2 心血管疾病和骨质疏松症临床用药的关系

1.4 中药治疗的优势

1.5 丹参

1.5.1 丹参与心血管疾病

1.5.2 丹参与骨质疏松症

1.6 川芎

1.6.1 川芎和心血管疾病

1.6.2 川芎与骨质疏松症

1.7 本课题研究的内容与意义

1.7.1 立题依据与意义

1.7.2 研究内容

参考文献

第二章丹参和川芎提取物的制备

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 实验材料

2.2.2 主要试剂

2.2.3 主要设备

2.2.4 实验方法

2.2.5 数据处理

2.3 结果与分析

2.3.1 丹参和川芎的得率

2.3.2 丹参提取物的 HPLC 含量分析

2.3.3 川芎提取物的 HPLC 含量分析

2.4 本章小结

参考文献

第三章动物模型的建立与丹参、川芎提取物对其相关脏器指数的影响

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验试剂

3.2.3 设备

3.2.4 实验方法

3.2.5 数据分析

3.3 结果与讨论

3.3.1 大鼠的体重变化情况

3.3.2 大鼠的子宫指数

3.3.3 大鼠肝脏指数

3.3.4 大鼠的肾脏指数

3.3.5 大鼠的脾脏指数

3.3.6 大鼠的胸腺指数

3.4 本章小结

参考文献

第四章丹参、川芎提取物对模型大鼠心血管系统的保护作用

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.2.1 实验材料

4.2.2 实验试剂

4.2.3 实验设备

4.2.4 实验方法

4.2.5 数据分析

4.3 结果与讨论：

4.3.1 各组大鼠的血脂水平

4.3.2 各组大鼠的血清转氨酶活性

4.3.3 各组大鼠肝脏的形态学变化

4.3.4 各组大鼠肝脏的脂肪积累

4.3.5 肝脏氧化和抗氧化情况的检测

4.3.6 肝脏的脂代谢相关基因的 mRNA 水平

4.3.7 肝脏的脂代谢相关基因的蛋白质水平

4.3.8 血管活性实验

4.3.9 血管分泌液中硝酸盐/亚硝酸盐的产生情况

4.3.10 血管相关基因的 mRNA 水平情况

4.4 本章小结

参考文献

第五章丹参、川芎提取物对模型大鼠骨骼系统的保护作用

5.1 引言

5.2 材料和方法

5.2.1 实验材料

5.2.2 实验试剂

5.2.3 实验设备

5.2.4 实验方法

5.2.5 数据分析

5.3 结果与分析

5.3.1 血清和尿液 Ca 浓度的检测

5.3.2 血清和尿液 P 浓度的检测

5.3.3 大鼠胫骨近端的骨参数

5.3.4 大鼠第二腰椎的骨参数

5.3.5 大鼠胫骨中段骨密度的比较

5.3.6 大鼠股骨中段的骨参数

5.4 本章小结

参考文献

第六章丹参、川芎提取物对类成骨细胞 UMR106增殖和分化的影响

6.1 引言

6.2 材料和方法

6.2.1 实验材料

6.2.2 实验试剂

6.2.3 实验仪器

6.2.4 实验方法

6.2.5 数据分析

6.3 结果与分析

6.3.1 丹参水提物对 UMR106 细胞增殖的影响

6.3.2 川芎醇提物对 UMR106 细胞增殖的影响

6.3.3 丹参水提物对 UMR106 细胞分化的影响

6.4 本章小结

参考文献

结论和展望

攻读博士学位期间取得的研究成果

致谢

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