水蛭提取液对牛视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导通路的影响

论文摘要

目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导的视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并进一步研究水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导通路的影响。从而探讨中药水蛭用于防治PVR的作用机制。 方法 (1)采用消化培养法,对牛视网膜色素上皮细胞进行体外培养。 (2)采用不同浓度的凝血酶,利用牛第3代RPE细胞,作用24小时后以MTT法测定OD值,筛选出最佳药物浓度。 (3)选择128mg/ml中药水蛭提取液和0.5NIHU/ml凝血酶,采用三种加药方式(中药和凝血酶同时加、先加凝血酶后加中药、先加中药后加凝血酶),选取20分钟时间点,观察牛第3代RPE细胞生长状态,并以MTT法测定OD值。 (4)选取20分钟时间点,采用3种加药方式,分别测定细胞内PKC活性、细胞内每毫克蛋白质催化产生的cAMP量和细胞内游离钙离子含量。 结果 (1)凝血酶以下浓度均有不同程度促进牛RPE细胞增殖的作用:2.5 NIHU/ml、8NIHU/ml (p<0.05);0.5NIHU/ml、1NIHU/ml、2NIHU/ml、4NIHU/ml (p<0.01),其中0.5 NIHU/ml和2 NIHU/ml作用最佳(p<0.01),具有可重复性。 (2)三种加药方式实验结果显示:①凝血酶组与空白组比较,OD

论文目录

• 常用中英文缩略语表
• 1 引言
• 2 实验材料
• 2.1 实验试剂及器材
• 2.2 实验动物取材
• 2.3 中药水蛭提取液的筛选和制备
• 3 实验方法
• 3.1 牛RPE细胞的体外培养
• 3.2 牛RPE细胞的鉴定
• 3.3 凝血酶浓度筛选
• 3.4 水蛭渗滤液对凝血酶诱导的RPE细胞增殖的影响
• 3.5 水蛭渗滤液对RPE细胞G蛋白信号转导通路的影响
• 3.5.1 水蛭渗滤液对RPE细胞内PKC活性的影响
• 3.5.2 水蛭渗滤液对RPE细胞内cAMP浓度的影响
• 2+浓度的影响'>3.5.3 水蛭渗滤液对RPE细胞内游离Ca²⁺浓度的影响
• 3.6 统计方法
• 4 实验结果
• 4.1 牛RPE细胞鉴定结果
• 4.2 凝血酶浓度筛选结果
• 4.3 水蛭渗滤液对凝血酶诱导的RPE细胞增殖的影响
• 4.4 水蛭渗滤液对RPE细胞G蛋白信号转导通路的影响
• 4.4.1 水蛭渗滤液对RPE细胞内cAMP浓度的影响
• 4.4.2 水蛭渗滤液对RPE细胞内PKC活性的影响
• 2+浓度的影响'>4.4.3 水蛭渗滤液对RPE细胞内游离Ca²⁺浓度的影响
• 5 讨论
• 5.1 水蛭渗滤液对凝血酶诱导的RPE细胞增殖的影响
• 5.2 水蛭渗滤液对牛RPE细胞G蛋白信号转导通路的影响
• 5.2.1 经典的G蛋白信号转导途径
• 5.2.2 牛RPE细胞上的凝血酶受体和G蛋白信号通路
• 5.2.3 水蛭渗滤液对牛RPE细胞细胞内PKC活性的影响
• 5.2.4 水蛭渗滤液对牛RPE细胞细胞内cAMP浓度的影响
• 2+浓度的影响'>5.2.5 水蛭渗滤液对牛RPE细胞细胞内游离Ca²⁺浓度的影响
• 6 结论
• 7 问题与展望
• 参考文献
• 致谢
• 综述：中医药与G蛋白跨膜信号转导关系的研究进展
• 参考文献
• 附图
• 附件
• 附件1 在校期间公开发表的学术论文
• 附件2 声明