PTEN乙酰化对肝糖异生的影响研究

论文摘要

目的:通过药物改变细胞内PTEN乙酰化水平,观察其对肝细胞糖异生的影响,初步探讨正常状态和油酸诱导的胰岛素抵抗环境中PTEN乙酰化水平的改变对肝脏糖异生所产生的影响,进一步明确PTEN参与胰岛素抵抗的分子机制。方法:体外培养BRL-3A细胞。正常大鼠肝细胞常规培养于含10%FBS的DMEM（高糖）中,5%CO2下37℃培养3～4d后,用0.25%胰蛋白酶消化传代。取处于对数生长期的细胞接种于新瓶中,达60%融合后弃掉原培养基,经不含血清的DMEM培养基同步处理24h后分组,随机分为5组:（1）空白对照组:10%FBS的高糖DMEM培养;（2）尼克酰胺（NAM）组:含尼克酰胺10mmol/L的培养基作用24小时;（3）白藜芦醇（RES）组:含白藜芦醇10μmol/L的培养基作用24小时;（以上各组均加有油酸的溶剂对照）（4）油酸组:含油酸0.5nmol/L的培养基处理16h;（5）油酸+尼克酰胺组:0.5nmol/L的油酸溶液作用16h后PBS轻轻冲洗2次,换用10mmol/L尼克酰胺溶液培养细胞24小时,最后各组加入10nM的胰岛素培养液培养30分钟,然后提取各组细胞总蛋白及总RNA,用WB及IP方法检测各组细胞内PTEN蛋白含量及其乙酰化水平,用RT-PCR法检测肝细胞内糖异生途径的关键基因PEPCK和G-6-Pase的转录水平。结果:（1）药物对肝细胞增殖的影响:尼克酰胺从浓度≥15mmol/L起细胞OD值显著减小,明显抑制了细胞的生长（P<0.01）,而白藜芦醇40μmol/L开始OD值显著减小（P<0.01）;（2）药物对细胞内PTEN蛋白含量影响:与空白对照组相比较,尼克酰胺组和白藜芦醇组细胞内PTEN蛋白含量差异均无统计学意义（P>0.05）,而油酸处理后,细胞内PTEN含量较空白组明显上升（P<0.01）;（3）对PTEN乙酰化水平的影响:与空白对照组相比,尼克酰胺作用后肝细胞内乙酰化PTEN蛋白水平明显升高（P<0.01）,白藜芦醇组则表现为降低（P<0.01）,油酸干预后细胞内乙酰化PTEN蛋白水平亦有所降低（P<0.01）;而与油酸组比较而言,油酸处理后再用尼克酰胺干预,细胞内乙酰化PTEN蛋白含量则有所增加（P<0.01）。（4）各组PEPCK和G-6-P mRNA的表达情况:与空白对照组比较,尼克酰胺组的PEPCK和G-6-P mRNA的表达有所降低（P<0.05）;而白藜芦醇组及油酸组均有升高（P<0.05）,其中油酸组的PEPCK和G-6-P mRNA的表达水平增高得尤为显著（P<0.01）;与油酸组相比:油酸+尼克酰胺组PEPCK和G-6-P mRNA的表达有所下降（P<0.01）。结论:（1）浓度分别为10mmol/L的尼克酰胺和10μmol/L的白藜芦醇对细胞内PTEN蛋白表达水平无明显影响,但能明显改变PTEN蛋白的乙酰化水平,尼克酰胺表现为增加,而白藜芦醇则恰恰相反;（2）油酸不仅能增强细胞内PTEN蛋白表达,同时还能降低其乙酰化水平;（3）PTEN乙酰化水平的增加能增强胰岛素对PEPCK及G-6-P基因转录的抑制作用,改善油酸诱导的肝胰岛素抵抗;而其乙酰化水平的下调则可降低胰岛素对PEPCK及G-6-P转录的抑制作用,降低胰岛素的敏感性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英汉缩略词对照表
• 致谢
• 综述
• 参考文献