论文摘要
背景和目的肿瘤治疗的基本手段有外科手术、放疗和化疗，近几十年取得了一定进展。其中化学药物治疗是肿瘤治疗中发展最快的一个领域，大量的针对不同靶点的新药开始应用于临床，对药物作用机制及药代动力学研究的进展，也使临床给药途径与方式更加适合于杀伤肿瘤细胞、保护正常组织。抗血管生成治疗的提出又为恶性肿瘤的治疗开辟了一个新领域，因其高效、低毒、不易发生耐药等优点，日益成为人们研究的热点。1971年，Folkman第一次提出针对肿瘤血管生成的靶向治疗策略后，人们开始研究化疗药物的抗血管生成作用。近期研究发现，某些细胞毒性药物的确能抑制血管生成过程，尤其是低剂量、高频率给药时，与MTD化疗伴一较长间歇期的给药方式相比，低剂量、高频率或持续给药对肿瘤血管内皮的靶向作用更强。这种类型的化疗方案称为“节律化疗”或“抗血管生成化疗”。王云等发现用CTX对小鼠Lewis肺癌进行节律化疗后肿瘤血管密度明显减少，瘤体与正常组织之间形成了一个完整的假性包膜，炎症细胞浸润和间质反应与未治疗的对照组和常规化疗组都有明显差别。为什么节律化疗后肿瘤组织出现了上述的变化呢?推测节律化疗可通过抑制炎症反应而间接发挥其抗血管生成作用。巨噬细胞是肿瘤组织间质成分的重要组成部分。现代研究发现在肿瘤部位有大量的巨噬细胞浸润，这些浸润的巨噬细胞对肿瘤生长速度、血管生长、基质形成及溶解均有影响。许多研究证实，NF-κB通过调节众多基因的转录参与多种生理、病理过程的调节，是联系炎症和肿瘤的关系的重要分子，在肿瘤血管新生中发挥核心的作用。为证实以上推测，本实验以荷Lewis肺癌的C57BL／6小鼠为模型，初步探讨常用化疗药物紫杉醇（Paclitaxel）节律化疗抑制肿瘤血管生成的作用，比较节律化疗与MTD化疗对肿瘤的控制情况及其毒副反应，同时观察小鼠肿瘤组织中微血管和巨噬细胞、NF-κB蛋白的表达以明确节律化疗是否可通过抑制局部炎症反应而间接发挥其抗血管生成作用。方法建立C57BL／6小鼠荷Lewis肺癌模型后，随机分为以下三组：①节律组腹腔注射紫杉醇（PTX）15mg／kg，隔天一次；②MTD组腹腔注射紫杉醇（PTX）100mg／kg，第1d，21d为一周期；③对照组。腹腔注射生理盐水0.2mL，隔天一次。每组10只小鼠。以上各组均于接种后第6d（皮下肿瘤约100～200mm3）开始给药，每日观察小鼠饮食、活动及一般状况。接种后第25d全部断颈处死小鼠。实验过程中，连续测量肿瘤体积和小鼠体重，分别绘制肿瘤生长曲线和小鼠体重变化曲线，观察各组的抑瘤效果及毒副作用。处死小鼠后称瘤重，用免疫组化方法测定各组肿瘤组织的微血管密度（MVD）及巨噬细胞（CD68）、核转录因子-κB（NF-κB）表达情况，并进行常规组织学观察。实验数据采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，计量资料采用方差分析，计数资料采用x2检验，巨噬细胞数和MVD值之间的关系采用Pearson相关分析，以α=0.05作为检验水准。结果1．PTX节律化疗组肿瘤生长曲线较平缓，但早期与对照组差别不大；MTD组肿瘤生长曲线在治疗后短期内下降，间歇期内又回升；对照组肿瘤生长曲线较陡直。2．PTX节律化疗组小鼠未出现明显体重下降，且小鼠的一般状况最好；MTD组小鼠在给药完成后一周内出现体重明显下降、行动迟缓、反应迟钝及皮毛失去光泽等毒副作用，于接种后第22d死亡一只，后期体重有所回升；对照组小鼠体重逐渐增加，后期肿瘤负荷较大，体重下降，接种后第20d和第23d各死亡一只。实验结束时，对照组、节律组和MTD组的平均瘤重分别为（4.26±0.36）g、（1.87±0.59）g、（2.02±0.34）g。3．肉眼观察大体标本，对照组及MTD组肿瘤假膜不完整，瘤组织颜色红润、质脆；节律组瘤块假膜完整，瘤组织颜色苍白、质韧。4．对照组、节律组和MTD组的微血管密度分别为26.38±2.56、15.10±2.06和23.51±2.78。节律组的微血管密度比对照组和MTD组显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；MTD组的微血管密度与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。5．对照组、节律组和MTD组的巨噬细胞计数分别为50.78±3.72、35.47±4.26和48.05±3.86。节律组的巨噬细胞计数比对照组和节律组显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；MTD组的巨噬细胞计数与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。节律组微血管计数和巨噬细胞计数Pearson相关系数γ为0.953，P＜0.05。6．节律组NF-κB在肿瘤组织中的表达较对照组和MTD组显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；对照组NF-κB在肿瘤组织中的表达和MTD组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论1．紫杉醇节律化疗能有效抑制Lewis肺癌的生长，抑瘤效果好于MTD化疗。2．紫杉醇节律化疗的毒副作用较MTD化疗小，可改善荷Lewis肺癌小鼠的生存状况。3．紫杉醇节律化疗可显著抑制Lewis肺癌肿瘤的血管生成。4．紫杉醇节律化疗后小鼠肿瘤组织中的NF-κB蛋白表达下降，巨噬细胞的数量亦减少，可能与节律化疗抗血管生成作用有关。