淫羊藿苷治疗亚急性衰老大鼠睾丸功能减退的实验研究

论文摘要

背景与目的中老年男子雄激素部分缺乏综合症（Partial Androgen Deficiency In The Aging Male，PADAM）是在增龄过程中，由于生殖内分泌衰老而出现的性欲低下、记忆力减退、认知功能降低、抑郁、易怒、疲乏、骨质密度下降、脂代谢紊乱等类似于性腺机能低下的症状，其重要原因是雄激素部分缺乏。目前睾酮补充治疗（Testosterone Supplementation Therapy，TST）虽然在某些方面具有一定的疗效，但在剂量、疗程和副作用等方面争议仍较大。淫羊藿苷（）是补肾壮阳之要药，具有抗衰老，调节生殖内分泌之功效。本实验采用D-半乳糖致亚急性衰老大鼠模型，观察淫羊藿苷及睾酮对衰老大鼠血清SOD活性、T、E2含量，睾丸组织形态学变化和睾丸组织一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）和间质细胞iNOS蛋白、衰老基因P16蛋白表达、睾丸生殖细胞凋亡的影响，探讨亚急性衰老大鼠睾丸功能减退的机理，评估该模型作为PADAM模型的可行性；探讨淫羊藿苷对生殖腺衰老作用机理，为临床治疗PADAM提供理论依据。材料与方法48只3月龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组（Control,C）、模型对照组（Model,M）、淫羊藿苷组（，ICA）、十一酸睾酮（testosterone undecanoate,TU）组。C组每天注射生理盐水2ml,其余3组每天按200mg／kg体重腹腔注射D-半乳糖连续6周，建立亚急性衰老动物模型。第7周开始，C、M组给予生理盐水2ml灌胃，ICA组每天按100mg-1kg·d-1体重灌服淫羊藿，TU组按50mg／kg给予肌注一次TU后处理同C、M组，连续给药两周。于第8周末用戊巴比妥钠（40mg／kg）麻醉后，右心房穿刺采血3—5ml；取睾丸固定，常规石蜡包埋，制作2um厚的连续切片。HE染色观察睾丸组织变化，SP法观察睾丸组织P16蛋白表达情况，SABC法观察间质细胞iNOS蛋白表达情况，TUNEL法检测睾丸生殖细胞凋亡情况。化学比色法检测TNOS、iNOS活性；采用硝酸酶还原法检测NO浓度。SOD用ELISA法检测，T及E2用放射免疫法检测。结果①动物一般情况及HE染色结果：模型组大鼠出现活动减少，毛发逐渐枯黄，且褪毛严重等衰老特征。HE染色显示睾丸组织出现退行性变化；淫羊藿苷和睾酮治疗后，大鼠活动增加，褪毛等衰老症状和睾丸组织的退行性变化显著改善。②血清SOD、睾酮及雌激素：模型组血清SOD活性、T浓度均较正常对照组显著下降（p＜0.01，p＜0.01）。与模型组比较，淫羊藿苷组和TU组血清SOD活性、T度均显著升高（p＜0.05，p＜0.01），而各组E2浓度变化无显著意义（p＞0.05）③睾丸TNOS、iNOS活性及NO浓度的变化：模型组睾丸组织NO浓度、TNOS、iNOS活性比正常对照组均显著增加（p＜0.01），淫羊藿苷治疗可以明显降低睾丸TNOS、iNOS活性及NO浓度，与模型组比较差异显著（p＜0.01）；睾酮治疗组睾丸TNOS、iNOS活性及NO浓度的降低没有统计学意义（p＞0.05）。④睾丸内iNOS蛋白表达结果：iNOS主要表达于睾丸间质细胞，模型组呈强阳性表达，阳性率较正常组显著增加（p＜0.01）；睾酮治疗组阳性率下降无显著意义（p＞0.05）；淫羊藿苷治疗组阳性率较模型组显著下降（p＜0.01）。⑤睾丸内P16蛋白表达结果：正常组大鼠睾丸组织P16主要在精原细胞和精子核内表达，间质细胞表达很少；模型组P16阳性率较正常组显著升高（p＜0.01），主要表现为间质细胞阳性表达明显增多；淫羊藿苷治疗组P16阳性细胞百分率较模型组显著下降（p＜0.01）；睾酮组P16阳性细胞百分率与模型组比较，差异无显著意义（p＞0.05）。⑥睾丸生殖细胞凋亡结果：正常组大鼠生殖细胞凋亡较少，细胞凋亡以精母细胞为主，间质细胞凋亡少见；模型组生殖细胞凋亡率较正常组明显增高（p＜0.01），间质细胞凋亡明显增多；与模型组比较，淫羊藿组和睾酮组生殖细胞凋亡均明显减少（p＜0.01，p＜0.05）。⑦相关分析结果：亚急性衰老大鼠生殖细胞凋亡率与P16蛋白表达阳性率（r=0.736，p＜0.01）、血清NO浓度（r=0.6，p＜0.01）、iNOS酶活性（r=0.572，p＜0.01）、TNOS酶活性（r=0.5586，p＜0.01）、iNOS蛋白阳性率（r=0.724，p＜0.01）均呈正相关；凋亡率与超氧化物歧化酶（SOD）活性（r=-0.572，p＜0.01）呈负相关；衰老基因P16蛋白表达与血清NO浓度（r=0.722，p＜0.01）、iNOS酶活性（r=0.661，p＜0.01）、TNOS酶活性（r=0.668，p＜0.01）、iNOS蛋白阳性率均呈正相关（r=0.846，p＜0.01）；与超氧化物歧化酶（SOD）活性（r=-0.501，p＜0.01）呈负相关。结论①亚急性衰老雄性大鼠睾丸组织出现退行性变化，雄激素水平下降，抗氧化能力减弱；生殖细胞尤其是间质细胞衰老和凋亡增多，生殖细胞的凋亡和衰老与睾丸组织内的iNOS活性增加及抗氧化能力降低相关，该模型做为研究性腺衰老与筛选抗衰老药物的动物模型具有一定的可行性。②淫羊藿苷和睾酮都可以提高亚急性衰老大鼠血清SOD活性、雄激素水平，减少生殖细胞凋亡，改善睾丸组织的退行性变化。③淫羊藿苷对性腺衰老的作用机制可能与其降低睾丸NOS活性和NO含量，减少睾丸间质细胞iNOS蛋白表达和细胞凋亡，抑制生殖细胞衰老基因P16蛋白表达有关。

论文目录

• 目录
• 缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 第3章 结果
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 第6章 展望
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 附录
• 致谢