分子标记鉴别香菇、黑木耳和毛木耳种质资源的研究

论文摘要

香菇、黑木耳和毛木耳是我国重要的食用菌品种,加强其种质资源的保护将利于我国食用菌产业的发展。本试验综合运用RAPD、ISSR和SRAP分子标记技术对28个香菇标准菌株和实验室所保藏的179个香菇、92个黑木耳和60个毛木耳菌株进行了遗传多态性分析。结果表明香菇、黑木耳和毛木耳品种中大部分的菌株间遗传相异系数都很低。在相异系数D=0.50的水平上,28个香菇标准菌株可分为5个群体。在研究中还发现了比较严重的疑似“同种异名"和疑似“同名异种”的情况。试验共获得了6个香菇SCAR标记、18个黑木耳SCAR标记和11个毛木耳SCAR标记。基于香菇的23个SCAR标记,黑木耳的18个SCAR和毛木耳的11个SCAR标记构建了28个香菇标准菌株、179个实验保藏香菇菌株、92个黑木耳和60个毛木耳菌株的SCAR标记菌株鉴别系统,用于对香菇、黑木耳和毛木耳的菌种鉴定。28个香菇标准菌株通过15个香菇SCAR标记可以被完全区分开来。179个实验室保藏的香菇菌株通过18个香菇SCAR标记可以被分为138类。92个黑木耳菌株通过18个黑木耳SCAR标记可以被分为65类。60个毛木耳菌株通过11个毛木耳SCAR标记可以被分为31类。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 香菇种质资源分子标记分析及SCAR标记的建立
• 第一节 香菇种质资源分子标记分析
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 试剂和仪器
• 1.4 菌丝培养
• 1.5DNA提取
• 1.6 PCR扩增反应体系和程序
• 1.7 DNA电泳检测
• 1.8 RAPD、SRAP、ISSR-基因组DNA指纹图谱资料分析
• 2.结果与分析
• 2.1 RAPD、ISSR、SRAP-基因组DNA指纹图谱多样性综合分析
• 2.2 RAPD、ISSR、SRAP综合聚类分析
• 3.讨论
• 第二节 香菇种质资源SCAR标记的建立
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 试剂和仪器
• 1.3 RAPD引物筛选
• 1.4 RAPD引物对28个香菇标准菌株的扩增
• 1.5 特异条带分析和目的片段的回收
• 1.6 感受态细胞的制备
• 1.7 目的片段与载体的连接
• 1.8 转化
• 1.9 阳性克隆的检测
• 1.10 测序分析
• 1.11 SCAR引物的设计
• 1.12 SCAR引物优化与验证
• 1.13 SCAR引物验证
• 2.结果与分析
• 2.1 28个香菇标准菌株RAPD扩增结果的特异标记片段分析
• 2.2 SCAR引物的设计及优化结果
• 2.3 SCAR标记的验证结果
• 2.4 香菇SCAR标记分析
• 2.5 香菇SCAR标记菌株鉴别树分析
• 3.讨论
• 第二章 黑木耳种质资源分子标记分析及SCAR标记的建立
• 第一节 黑木耳种质资源分子标记分析
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 试剂仪器
• 1.4 菌丝培养（同第二章）
• 1.5 DNA提取（同第二章）
• 1.6 PCR扩增反应体系和程序（同第二章）
• 1.7 DNA电泳检测（同第二章）
• 1.8 RAPD、SRAP、ISSR-基因组DNA指纹图谱数据分析（同第二章）
• 1.9 特异条带分析和目的片段的回收（同第二章）
• 1.10 感受态细胞的制备（同第二章）
• 1.11 目的片段与载体的连接（同第二章）
• 1.12 转化（同第二章）
• 1.13 阳性克隆的检测（同第二章）
• 1.14 测序分析（同第二章）
• 1.15 SCAR引物的设计（同第二章）
• 1.16 SCAR引物优化与验证（同第二章）
• 1.17 SCAR引物验证
• 2.结果与分析
• 2.1 RAPD、ISSR、SRAP多态性分析
• 2.2 RAPD、ISSR、SRAP综合聚类分析
• 2.3 特异标记片段分析
• 2.4 SCAR引物的设计及优化结果
• 2.5 黑木耳SCAR标记分析
• 2.6 黑木耳SCAR标记菌株鉴别树分析
• 3.讨论
• 第三章 毛木耳种质资源分子标记分析及SCAR标记的建立
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 试剂仪器
• 1.4 菌丝培养（同第二章）
• 1.5 DNA提取（同第二章）
• 1.6 PCR扩增反应体系和程序（同第二章）
• 1.7 DNA电泳检测（同第二章）
• 1.8 RAPD、SRAP、ISSR-基因组DNA指纹图谱数据分析（同第二章）
• 1.9 特异条带分析和目的片段的回收（同第二章）
• 1.10 感受态细胞的制备（同第二章）
• 1.11 目的片段与载体的连接（同第二章）
• 1.12 转化（同第二章）
• 1.13 阳性克隆的检测（同第二章）
• 1.14 测序分析（同第二章）
• 1.15 SCAR引物的设计（同第二章）
• 1.16 SCAR引物优化与验证（同第二章）
• 1.17 SCAR引物验证
• 2.结果与分析
• 2.1 RAPD、ISSR、SRAP多态性分析
• 2.2 RAPD、ISSR、SRAP综合聚类分析
• 2.3 特异标记片段分析
• 2.4 SCAR引物的设计及优化结果
• 2.5 毛木耳SCAR标记分析
• 2.6 毛木耳SCAR标记分析
• 3.讨论
• 参考文献
• 附表
• 附图
• 致谢