肾精亏虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠生殖系统影响的机制研究

论文摘要

目的 男子肾精对其子嗣之寿夭有非常重要的意义。本研究系统整理与分析历代“胎孕理论”，并藉此为理论基础，以“惊恐复合房劳”复制的小鼠肾精亏虚模型为平台，研究肾精亏虚雄性小鼠对其雄性仔鼠生殖系统的影响及其机制，初步探讨肾精亏虚的科学内涵。 方法 将30只雄性昆明小鼠用计算机取随机数法随机分为正常对照组、模型组和补肾组三组。实验方法：模型组和补肾组采用房劳加惊恐的复合伤肾法制造肾精亏虚模型。补肾组每天给予0.16ml／10g体重的补肾填精方浓缩液灌胃。正常对照组及模型组予等量生理盐水灌胃，造模并给药21天。从造模结束次日起，所有小鼠与正常发情雌鼠配对饲养5天后 ①检测其精子密度及活率；②取出雌鼠待其分娩，分别计算各组配对雌鼠妊娠率和每胎生产数（仔鼠总数／妊娠并分娩的雌鼠只数）以评估父代小鼠生育力；③取附睾精子，同时进行精子单细胞凝胶电泳、精子染色体结构分析检测其精子DNA损伤；④观察其睾丸组织形态学及超微结构改变，并用Johnsen 10级积分、测量生精小管直径、生精上皮厚度等方法进行量化评估。仔鼠饲养至6周龄时检测以下指标：①检测其精子密度及活率；②眼球取血1ml，检测其血清睾酮、卵泡刺激素含量；③检测其睾丸组织匀浆上清中丙二醛、过氧化物岐化酶、总抗氧化能力水平；④流式细胞术分析其睾丸组织生精细胞凋亡率；⑤取附睾精子，同时用SCGE、SCSA检测其精子DNA损伤；⑥取睾丸组织，用mRNA差异显示分析各组睾丸组织mRNA表达的差异；⑦观察其睾丸组织形态学及超微结构改变。 结果 实验结果显示，模型小鼠睾丸组织中支持细胞变性，生精小管出现不同程度萎缩，生精上皮变薄，其各层细胞排列紊乱；电镜下可见生精小管界膜增厚，并有低电子密度沉积物，支持细胞线粒体、内质网等细胞器肿胀变性；精子密度、活动率下降；与其配对的雌鼠妊娠率、每胎产仔数等指标均明显降低，显示其生育力下降；而其精子DNA完整性则明显受损。所有这些病理改变在补肾组都明显较轻，甚至无异常改变。 与正常组仔鼠相比，模型组仔鼠：①精子密度及精子活动率明显降低；②血清FSH、T含量下降；③睾丸组织MDA含量上升，T-AOC水平下降，总SOD含量无明显改变；④睾丸组织细胞凋亡率上升，1C细胞比例下降；⑤SCGE及SCSA均显示精子DNA断裂比例上升；⑥睾丸组织mRNA表达明显不同。补肾组仔鼠则几乎没有类似改变；⑦睾丸生精小管出现不同程度萎缩，生精上皮变薄，生精上皮各层细胞排列紊乱，Johnsen积分和生精小管直径均降低；⑧电镜下可见轻度增厚的生精小管界膜及界膜下低电子密度沉积物，支持细胞中可见变性的线粒体和内质网，各级精母细胞可见胞空泡和胞质致密小体，精子细胞变形过程中可见顶体脱落或缺陷及线粒体鞘形成不规则。补肾组仔鼠则几乎没有类似改变。 结论 肾精亏虚可以引起生殖系统损伤。肾虚雄性小鼠确实对其仔

论文目录

• 名词术语英中文对照表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 理论探讨
• 1 中医的胎孕理论沿革
• 1.1 形气相感
• 1.2 精血相裹
• 1.3 两精相搏
• 2 男子肾精在受胎中的作用
• 2.1 肾精释义
• 2.2 肾精与生殖之精
• 3 肾精对其子嗣的影响
• 3.1 性别差异
• 3.2 禀赋厚薄
• 实验研究
• 前言
• 实验一 肾虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠生育力的影响
• 1 材料与方法
• 2 检测方法及结果
• 3 小结与讨论
• 实验二 雄性小鼠肾虚对其雄性仔鼠血清生殖激素含量的影响
• 1 材料与方法
• 2 检测方法与结果
• 3 小结与讨论
• 实验三 雄性小鼠肾虚对其雄性仔鼠睾丸组织MAD、SOD、T-AOC的影响
• 1 材料与方法
• 2 检测方法及结果
• 3 小结及讨论
• 实验四 雄性小鼠肾虚对其雄性仔鼠睾丸生精细胞凋亡的影响
• 1 材料与方法
• 2 检测方法及结果
• 3 小结与讨论
• 实验五 肾虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠精子DNA损伤程度的影响
• 1 材料与方法
• 2 检测方法及结果
• 3 小结与讨论
• 实验六 肾虚雄性小鼠之雄性仔鼠睾丸mRNA差异显示分析
• 1 材料与方法
• 2 检测方法及结果
• 3 小结与讨论
• 实验七 肾虚对雄性小鼠及其雄性仔鼠睾丸组织形态学的影响
• 1 材料与方法
• 2 观察方法与结果
• 3 小结及讨论
• 总结与讨论
• 1肾虚对小鼠生殖系统的影响
• 1.1 肾虚模型的选择
• 1.2 肾虚使小鼠生育力下降
• 2 父代肾虚对其仔鼠雄性生殖系统的影响及机制
• 2.1 父代肾虚对其仔鼠雄性生殖系统的影响
• 2.2 父代肾虚对其雄性仔鼠生殖系统影响的机制
• 综述:精子 DNA损伤与保护
• 致谢