论文摘要
MicroRNAs是近年来发现的一类重要的基因调节分子,在生理和疾病过程中的重要作用被越来越多的研究证实,在多种肿瘤中表达异常,但是其在肝癌发生发展中的作用研究仅处于初级阶段。因此本研究首先通过芯片技术检测78对肝癌/癌旁肝组织及10例正常肝组织的microRNAs表达谱,以寻找在肝癌发生发展过程中发挥重要作用的microRNAs,并分析这些microRNAs与肝癌患者临床特征的相关性,继而深入探讨microRNAs在肝癌中发挥作用的机制。芯片结果显示根据microRNAs表达谱可清楚的将肝癌、癌旁肝和正常肝组织分为三组。进而发现84个microRNAs在肝癌、癌旁肝和正常肝组织之间差异表达,其中69个microRNAs在肝癌和癌旁肝组织之间差异表达,55个microRNAs在肝癌和正常肝组织之间差异表达,27个在癌旁肝和正常肝组织之间差异表达,10个在肝癌、癌旁肝和正常肝组织之间都差异表达。利用支持向量机和留一交叉法预测模型,用上述差异表达的69、55和27个microRNAs表达谱可分别将89.70%的肝癌和癌旁肝组织,100%的癌和正常肝组织,97.70%的癌旁肝和正常肝组织正确辨认。随机选取8个差异表达的microRNAs,用real time RT PCR法进行验证,此结果显示microRNAs的表达情况与芯片分析结果高度吻合,这证明了芯片结果的可靠性。另外我们发现一些差异表达microRNAs与肝癌患者的临床特征相关。例如hsa-miR-296、hsa-miR-122a和hsa-miR-93分别与肝硬化、乙肝病毒感染和肝癌转移有关。而最重要的是hsa-miR-125b高表达者术后生存时间较长（风险比为1.787;95%可信区间为1.020-3.133,p=0.043）。进一步研究发现hsa-miR-125b通过抑制G1到S期的细胞周期转换而抑制肝癌细胞生长,并可抑制Akt的磷酸化。而hsa-miR-93可以通过促进G1到S期的细胞周期转换而促进肝癌细胞生长。另外,我们还通过另一个研究方案寻找在肝癌中发挥作用的microRNAs及它们的作用机制。即利用重要的细胞周期调控因子cyclin D1转基因小鼠模型,找出cyclin D1相关的microRNAs,进而找出其与人肝癌组织异常表达microRNAs的交集:hsa-miR-200b和hsa-miR-365,并研究这两个microRNAs在肝癌中的作用机制。结果发现hsa-miR-200b和hsa-miR-365可以通过调控细胞周期促进肝癌细胞的生长。此方案找出肝癌相关microRNAs,有明确的功能研究切入点,为microRNAs在肝癌中作用研究提供了一个新的思路。上述研究结果可总结为:肝癌中microRNAs表达谱明显异常;MicroRNAs表达谱可区分肝癌与非癌组织;MiR-125b可以用于预测肝癌患者的预后;MiR-125b和miR-93分别通过抑制或者促进肝癌细胞生长而参与肝癌的发生发展;Cyclin D1相关的microRNAs在肝癌中通过调控细胞周期发挥作用。