论文摘要
目的:复制大鼠CAG癌前病变模型,观察益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对大鼠慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）癌前病变的治疗效果,并从细胞凋亡及基因水平深入研究大鼠CAG癌前病变的发病机制和三种活血法防治大鼠CAG癌前病变的作用机理。方法:采用幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法复制CAG癌前病变模型,从大体标本和光镜病理两方面观察CAG癌前病变大鼠形态学特征,采用流式细胞术检测CAG癌前病变模型大鼠胃粘膜细胞凋亡;应用表达谱基因芯片技术筛选CAG癌前病变大鼠胃粘膜的差异表达基因。CAG癌前病变模型复制成功后,采用代表益气活血法、活血化瘀法和理气活血法的中药进行治疗,从大体标本和光镜病理两方面观察益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠胃粘膜形态学的影响;采用流式细胞术检测益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠胃粘膜细胞凋亡的影响。应用表达谱基因芯片技术检测益气活血法、活血化瘀法和理气活血法干预后CAG癌前病变大鼠胃粘膜基因的差异表达变化,筛选出差异表达基因,建立三种活血法干预后CAG癌前病变大鼠差异基因表达谱并进行生物信息学分析。结果:1采用幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃法,于造模第24周随机抽取模型组大鼠8只进行胃粘膜光镜病理检查,其中7只出现轻-中度不典型增生,造模成功。2流式细胞术检测CAG癌前病变模型大鼠胃粘膜细胞凋亡:CAG癌前病变模型组大鼠胃粘膜细胞早期凋亡率明显高于正常组（P＜0.01）。3益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠治疗12周后,大体标本观察结果显示:益气活血法、活血化瘀法对胃粘膜糜烂或溃疡、皱襞紊乱、粘膜皱襞平坦和增生结节有明显疗效,与自然恢复组比较有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）;理气活血组也显示出一定的治疗作用,但与自然恢复组比较,无显著性差异（P＞0.05）。4益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠治疗12周后,光镜病理观察结果显示:益气活血法、活血化瘀法对CAG异型增生的积分有显著的降低效果,与自然恢复组比较有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）;理气活血法对对CAG异型增生的积分有降低效果,但与自然恢复组比较无显著性差异（P＞0.05）。5益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠治疗12周后,流式细胞术检测结果显示:CAG癌前病变自然恢复组大鼠胃粘膜细胞早期凋亡率明显高于空白对照组（P＜0.01）,益气活血法、活血化瘀法和理气活血法干预各组胃粘膜细胞早期凋亡率均有降低,其中活血化瘀组、理气活血组与自然恢复组比较早期凋亡率的降低有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05）,益气活血组显示出降低早期凋亡率的趋势,但与自然恢复组比较未见明显差异（P=0.057）。6聚类分析的结果表明益气活血组的基因表达谱模式与模型组反差最大,提示益气活血组的治疗效果可能较好,热休克蛋白70（heat shock 70kD protein,HSP70）及其相邻的几个基因是模型组和益气活血组反差最大的区域,提示这几个基因可能是益气活血法作用机制较明确的靶标。7应用表达谱基因芯片技术筛选CAG癌前病变大鼠的差异表达基因:CAG癌前病变大鼠胃粘膜发生显著性差异表达变化的基因有300个,其中上调基因227个,下调基因73个,差异表达基因的功能涉及到多种生物学过程及信号传递调控基因的改变,其中下调基因中包括HSP70基因。8应用表达谱基因芯片技术检测益气活血法干预后CAG癌前病变大鼠胃粘膜基因的差异表达变化:共筛选出差异表达基因205个,其中上调基因为101个,下调基因104个,共同构成了益气活血法干预大鼠CAG癌前病变的差异表达基因谱,为从基因水平探讨益气活血法防治CAG癌前病变的作用机理提供了有益的实验依据,其中上调基因中包括HSP70基因;活血化瘀组筛选出差异表达基因23个,其中上调基因为0个,下调基因23个,理气活血组筛选出差异表达基因14个,其中上调基因为8个,下调基因6个,活血化瘀组与理气活血组差异基因功能分类特征不显著,未作进一步分析。结论:1幽门弹簧插入配合高盐热糊灌胃能法成功复制CAG癌前病变大鼠模型,细胞凋亡增强可能是CAG癌前病变的发病机理之一。2益气活血法和活血化瘀法对大鼠CAG癌前病变有较好的阻断和逆转作用。3益气活血法、活血化瘀法和理气活血法对CAG癌前病变大鼠胃粘膜细胞凋亡均有抑制作用,可能是其改善或逆转大鼠CAG癌前病变的作用机理之一。4 CAG癌前病变的发生是一个复杂的病理生理过程,受多种基因调控;差异表达基因谱的建立和研究较全面反映了CAG癌前病变发生的分子生物学概貌,有助于认识CAG癌前病变形成的机制,为进一步寻找特异性诊断和治疗基因提供了有力的实验依据。5益气活血法对大鼠CAG癌前病变胃粘膜基因表达的影响涉及到多种生物学过程信号传递及基因调控的改变,从基因水平说明中医益气活血法对CAG癌前病变的影响是一个复杂的、多层次的、多靶点的病理生理功能调整的过程。HSP70基因可能是益气活血法防治大鼠CAG癌前病变作用机制的靶标之一,可以进一步做蛋白表达等方面的深入研究。
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