论文摘要
为了探讨转基因植物的商业化生产对生物安全性的影响,本试验在2年大田栽培条件下,以转Bt基因抗虫棉GK-12 （Bt cotton）和常规棉泗棉3号（non-Bt cotton）为材料,利用传统的培养方法和分子生物学方法,对其叶面微生物遗传多样性进行了研究,结果如下:1.棉花叶面可培养细菌、真菌和放线菌数量与其生长发育呈正相关。苗期叶面微生物的数量少,现蕾期开始增多,到花铃期叶面微生物的数量达到高峰,吐絮期下降。虽然Bt cotton和non-Bt cotton叶面微生物的数量随棉花生长发育变化趋势一致,但同一生育期两个品种叶面微生物数量存在显著差异:现蕾期和花铃期Bt cotton叶面细菌的数量远远多于non-Bt cotton,差异达到极显著水平;在吐絮期,Bt cotton和non-Bt cotton叶面真菌的数量变化存在显著差异;在现蕾期,Bt cotton叶面真菌的数量少于non-Bt cotton,差异达到极显著水平;在现蕾期Bt cotton叶面放线菌的数量远远多于non-Bt cotton,差异达到极显著水平;在花铃期non-Bt cotton叶面放线菌的数量多于Bt cotton,且差异达到极显著水平。2.根据各细菌生理群数量等级的划分,在花铃期和吐絮期,Bt cotton和non-Bt cotton叶面细菌生理群共同的优势类群为好气性纤维素分解菌和乳酸杆菌;两个品种叶面其它细菌生理群则存在较大差异。3.对Bt cotton和non-Bt cotton叶面细菌生理群的多样性变化分析表明:在花铃期Bt cotton叶面细菌生理群Simpson指数、Shannon-Wiener指数和均匀度比non-Bt cotton高;在吐絮期Bt cotton叶面细菌生理群Simpson指数、Shannon-Wiener指数和均匀度比non-Bt cotton低。4.通过正交试验设计,建立了棉花叶面微生物基因组总DNA的提取方法,最佳设计为:SDS浓度为20mg/mL,溶菌酶浓度为30mg/mL,蛋白酶K浓度为10mg/mL,37℃温育时间180min。5.利用PCR-PAGE对叶面微生物进行分析, Bt cotton和non-Bt cotton的叶面微生物在苗期、现蕾期、花铃期具有较高的相似性,遗传多样性较为一致,遗传相似性系数分别为87%、88%、81%;在吐絮期,Bt cotton和non-Bt cotton的叶面微生物相似性低于65%,表明Bt cotton和non-Bt cotton叶面微生物的遗传多样性差异明显。
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标签：转基因抗虫棉论文; 叶面微生物论文; 多样性论文; 风险评价论文; 聚丙烯酰胺凝胶电泳论文;