本文主要研究内容
作者刘婵,陈春艳,商黔惠,刘娟（2019）在《应用CRISPR/Cas9技术制备Ace2基因敲除小鼠模型及基因型的鉴定》一文中研究指出：本研究旨在应用CRISPR/Cas9技术高效构建Ace2 （angiotensin-converting enzyme 2）基因敲除小鼠模型,并繁殖、鉴定及验证Ace2基因敲除小鼠。通过构建靶向敲除Ace2基因的载体,体外将Cas9 mRNA和向导RNA （guide RNA, gRNA）显微注射到小鼠受精卵中,通过PCR和TA克隆测序对小鼠Ace2基因的第3至18号外显子删除情况进行检测和鉴定,繁育Ace2基因敲除小鼠并利用qRT-PCR和Western blot方法验证获得的Ace2-/Y小鼠主要脏器中Ace2 mRNA和蛋白表达情况。结果显示,顺利构建表达gRNA载体并体外转录,成功将有活性的gRNA和Cas9 mRNA直接注射入受精卵,获得6只阳性F0代初建鼠,PCR和基因测序鉴定表明成功删除了小鼠Ace2基因的第3至18号外显子;F0代鼠与野生型鼠回交,得到3只阳性F1代鼠,再与野生型鼠相交配得到的后代为F2代,在F2代中选择Ace2-/+雌性杂合子鼠与野生型鼠交配,获得F3代Ace2-/Y雄性纯合子小鼠。qRTPCR和Western blot结果表明,F3代Ace2-/Y小鼠肾脏和肺中未检测到Ace2 mRNA和蛋白表达。本方法通过CRISPR/Cas9技术成功制备了Ace2基因敲除小鼠模型,为进一步研究Ace2基因功能奠定了基础。
Abstract
ben yan jiu zhi zai ying yong CRISPR/Cas9ji shu gao xiao gou jian Ace2 （angiotensin-converting enzyme 2）ji yin qiao chu xiao shu mo xing ,bing fan shi 、jian ding ji yan zheng Ace2ji yin qiao chu xiao shu 。tong guo gou jian ba xiang qiao chu Ace2ji yin de zai ti ,ti wai jiang Cas9 mRNAhe xiang dao RNA （guide RNA, gRNA）xian wei zhu she dao xiao shu shou jing luan zhong ,tong guo PCRhe TAke long ce xu dui xiao shu Ace2ji yin de di 3zhi 18hao wai xian zi shan chu qing kuang jin hang jian ce he jian ding ,fan yo Ace2ji yin qiao chu xiao shu bing li yong qRT-PCRhe Western blotfang fa yan zheng huo de de Ace2-/Yxiao shu zhu yao zang qi zhong Ace2 mRNAhe dan bai biao da qing kuang 。jie guo xian shi ,shun li gou jian biao da gRNAzai ti bing ti wai zhuai lu ,cheng gong jiang you huo xing de gRNAhe Cas9 mRNAzhi jie zhu she ru shou jing luan ,huo de 6zhi yang xing F0dai chu jian shu ,PCRhe ji yin ce xu jian ding biao ming cheng gong shan chu le xiao shu Ace2ji yin de di 3zhi 18hao wai xian zi ;F0dai shu yu ye sheng xing shu hui jiao ,de dao 3zhi yang xing F1dai shu ,zai yu ye sheng xing shu xiang jiao pei de dao de hou dai wei F2dai ,zai F2dai zhong shua ze Ace2-/+ci xing za ge zi shu yu ye sheng xing shu jiao pei ,huo de F3dai Ace2-/Yxiong xing chun ge zi xiao shu 。qRTPCRhe Western blotjie guo biao ming ,F3dai Ace2-/Yxiao shu shen zang he fei zhong wei jian ce dao Ace2 mRNAhe dan bai biao da 。ben fang fa tong guo CRISPR/Cas9ji shu cheng gong zhi bei le Ace2ji yin qiao chu xiao shu mo xing ,wei jin yi bu yan jiu Ace2ji yin gong neng dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自生理学报的刘婵,陈春艳,商黔惠,刘娟，发表于刊物生理学报2019年04期论文，是一篇关于基因敲除小鼠论文,鉴定论文,生理学报2019年04期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自生理学报2019年04期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：基因敲除小鼠论文; 鉴定论文; 生理学报2019年04期论文;