薏苡抗菌蛋白组的分离鉴定

论文摘要

本文实验部分以薏苡种子为试验材料,联合利用了凝胶过滤色谱、离子交换色谱以及疏水层析色谱对薏苡中的抗真菌蛋白进行了快速的分离分析。首先通过比较测定抗菌活性大小确定制备薏苡种子抗真菌蛋白的最佳提取缓冲液条件为pH5.0的乙酸-氢氧化钠提取液,在此条件下得到的薏苡抗真菌蛋白的抗真菌活性明显且得率高。将此提取缓冲液提取所得的总蛋白进行多部色谱分离,并在分离同时选用绿色木霉病菌作为活性测定菌种进行活性跟踪,先用凝胶色谱柱（Superose12HR10/30 10mm×300mm）进行分离纯化,将有活性的粗组分继续用高分辨率的阳离子交换柱（MonoSHR5/5 5mm×50mm）重复进行色谱分离,将得到的具有活性的色谱峰再用疏水预装柱（RESOURCE1mlHICIso 6.4mm×30mm）进行分离,最终得到四种色谱行为不同的蛋白质,经测定其中两种蛋白对绿色木霉病菌、小麦赤霉病菌、杨树溃疡病菌的生长有较强的抑制作用。然后将这两种抗菌蛋白进行质谱鉴定,首先经四极杆串联飞行时间质谱（Q-TOF）分析,得到两种蛋白的精确分子量为22118.7Da、21973.3Da;然后将以上蛋白进行溶液内酶切后进行用激光辅助解析飞行时间质谱（MALDI-TOF）进行了肽指纹图谱分析并继续采用四极杆串联飞行时间质谱对蛋白质的部分氨基酸序列进行分析,和网上数据库进行比对并进行BLAST同源性搜索,最终确定其中两个为同源性很高的壳聚糖酶。但是这两种蛋白之间的进一步的信息还有待进一步的研究。植物抗菌蛋白具有抗菌机制特殊、不易产生耐药性、安全性高、应用灵活等特点,近年来一直是研究热点。所以,本研究为抗真菌药物的研究与开发提供了有益线索。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 抗真菌蛋白研究概况及展望
• 1.1 病程相关蛋白
• 1.2 防卫素
• 1.3 核糖体失活蛋白
• 1.4 脂转移蛋白
• 1.5 甜味类蛋白
• 1.6 杀手蛋白
• 1.7 亲环素类蛋白
• 1.8 其他蛋白
• 1.9 抑菌蛋白的研究展望
• 2 蛋白质研究技术概况
• 2.1 蛋白质组学简介
• 2.2 蛋白质研究技术
• 第二章 薏苡抗菌蛋白的分离鉴定
• 1 前言
• 2 材料、试剂及仪器
• 2.1 材料
• 2.2 试剂及耗材
• 2.3 仪器
• 3 方法
• 3.1 薏苡中总蛋白提取方法比较
• 3.2 抗真菌活性检测
• 3.3 薏苡中总蛋白提取方法的确定
• 3.4 薏苡抗真菌蛋白的色谱分离、纯化
• 3.5 抗菌活性蛋白的质谱鉴定
• 4 结果与分析
• 4.1 薏苡中总蛋白提取方法的比较结果
• 4.2 薏苡中总蛋白提取率的计算
• 4.3 薏苡抗真菌蛋白的色谱分离、纯化
• 4.4 薏苡抗真菌蛋白的质谱鉴定
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢