论文摘要
目的:克隆人抑瘤素（hOSM）基因,在COS7细胞和WI-38细胞中进行重组表达并检测表达蛋白的生物学活性,初步阐明OSM细胞因子的抑瘤作用以及在造血中的作用,为OSM的基础和应用性研究打下基础。 方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCm-T载体连接后,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3.1/myc-his（-）A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hOSM,采用PCR、限制性酶双酶切法鉴定和经DNA测序正确后在COS-7细胞中进行瞬时表达,采用RT-PCR鉴定hOSM基因的转录,MTT法研究表达产物对A375细胞的生长抑制活性。并将pcDNA3.1A-hOSM真核表达载体转染WI-38细胞,经G418筛选获得稳定表达的转基因细胞;采用RT-PCR鉴定hOSM基因在WI-38细胞中的转录,MTT法研究表达产物抑制A375细胞和A549细胞生长的生物学特性,流式细胞仪法测定A375细胞的细胞周期,利用原代培养的第4代骨髓基质细胞研究hOSM对造血的支持作用。 结果:重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且所克隆的片段确为hOSM基因,与GeneBank报导序列完全一致,并成功的在COS-7细胞中瞬时表达了具有抑制A375细胞生长rhOSM蛋白。获得稳定表达的转基因WI-38细胞,rhOSM表达产物能引起A375细胞的细胞周期G1→S
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