论文摘要
本试验利用PCR技术扩增了标准血清2型RA的42KDa外膜蛋白基因片段（OmpA-2）1045bp,与原核表达载体pGEX-4T-1连接构建重组表达载体,转入大肠杆菌BL21菌株中。在1mM的IPTG诱导下,表达融合蛋白,诱导后5h蛋白表达量达到高峰。融合表达蛋白GST-OmpA1-2的分子量约为65KDa,以包涵体形式存在。 以脱氧胆酸钠（DOC）洗涤包涵体,然后用N—十二烷基肌氨酸钠（SKL）溶解,将溶解包涵体进行透析复性。分别用亲和层析法、电洗脱法和研磨法对GST-OmpA1-2融合蛋白进行了纯化,亲和层析纯化效果不佳,电洗脱法和研磨法则获得了较好的纯化效果。 将GST-OmpA1-2融合表达蛋白免疫鸭,采血分离血清。GST-OmpA1-2以0.85μg/mL的浓度包被酶标反应板,鸭抗2型RA阳性血清进行200×稀释,HRP-山羊抗鸭IgG作5000×稀释,建立间接ELISA方法检测免疫鸭的抗体水平。间接ELISA和Western-blotting试验结果均表明GST-OmpA1-2表达蛋白具有良好的反应原性。以2型RA强毒攻击免疫鸭,结果表明GST-OmpA1-2表达蛋白对免疫鸭不能提供完全保护。 研究认为GST-OmpA1-2表达蛋白具有良好的反应原性,阻断试验表明不存在血清型特异性,所以,GST-OmpA1-2可望作为包被抗原用于RA的诊断试剂盒的制备。
论文目录
相关论文文献
- [1].坏死梭杆菌93ku重组外膜蛋白的免疫原性分析[J]. 系统医学 2020(01)
- [2].胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白W自杀性质粒的构建[J]. 湖北农业科学 2017(01)
- [3].副猪嗜血杆菌主要外膜蛋白基因研究进展[J]. 动物医学进展 2013(01)
- [4].猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白型的研究[J]. 山东农业科学 2011(03)
- [5].禽多杀性巴氏杆菌血清型与外膜蛋白型相关性研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2011(15)
- [6].阪崎肠杆菌外膜蛋白基因的克隆与序列分析[J]. 中国卫生检验杂志 2011(10)
- [7].大肠杆菌外膜蛋白酶T研究进展[J]. 中国家禽 2019(15)
- [8].禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H受体的初步鉴定[J]. 中国人兽共患病学报 2017(01)
- [9].鲍曼不动杆菌外膜蛋白A的克隆表达及纯化[J]. 转化医学电子杂志 2015(05)
- [10].布鲁氏菌外膜蛋白16基因的克隆及原核表达[J]. 中国畜牧兽医 2013(09)
- [11].鲍曼不动杆菌外膜蛋白W的克隆表达及纯化[J]. 中国病原生物学杂志 2016(02)
- [12].肠出血性大肠杆菌O157外膜蛋白的SDS-PAGE分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2008(10)
- [13].柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达[J]. 赣南师范学院学报 2014(06)
- [14].绵羊附睾种布鲁氏菌019株外膜蛋白基因序列比较研究[J]. 疾病监测 2010(09)
- [15].鲍曼不动杆菌外膜蛋白34的表达纯化及其生物活性分析[J]. 生物技术通报 2017(07)
- [16].牛多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H的表达与纯化[J]. 中国畜牧兽医 2013(11)
- [17].革兰氏阴性细菌β-桶状结构外膜蛋白体外折叠的研究进展[J]. 微生物学报 2014(11)
- [18].鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A基因表达及抗原性鉴定[J]. 黑龙江八一农垦大学学报 2010(02)
- [19].禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因在真核细胞中的表达及检测[J]. 畜牧与兽医 2010(07)
- [20].鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化[J]. 华中农业大学学报 2015(03)
- [21].肺炎嗜衣原体主要外膜蛋白的克隆表达与抗原性研究[J]. 微生物学免疫学进展 2008(01)
- [22].鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A的克隆与表达[J]. 浙江农业学报 2008(02)
- [23].鸭源鸡杆菌外膜蛋白A基因克隆及结构与功能分析[J]. 河南农业科学 2017(08)
- [24].大肠埃希菌外膜蛋白F与细菌耐药性研究进展[J]. 动物医学进展 2013(06)
- [25].鸭疫里氏杆菌地区流行株的分离与外膜蛋白A的变异性分析[J]. 中国兽医科学 2011(06)
- [26].鸭致病性大肠杆菌外膜蛋白型研究[J]. 畜牧兽医学报 2009(04)
- [27].鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因克隆及结构与功能分析[J]. 中国兽医学报 2017(01)
- [28].布鲁菌外膜蛋白16纯化方法的改进[J]. 动物医学进展 2013(12)
- [29].血清1和3型多杀性巴氏杆菌铁调控外膜蛋白共同抗原的初步分析[J]. 畜牧兽医学报 2008(02)
- [30].梅毒外膜蛋白的最新研究进展[J]. 中国病原生物学杂志 2019(08)
标签：免疫论文;