新疆甜瓜果实绿色条纹性状AFLP标记的初步筛选

论文摘要

甜瓜（Cucumis melo L.）是新疆有特色的重要经济作物,新疆甜瓜以其特有的优良风味和品质享誉国内外,且种质资源丰富。对于新疆甜瓜生产来说,选育优良品种是最重要的环节。传统的常规育种方法育种周期长且工作量大,不能满足目前生产需要。而分子标记技术的产生和应用为加快育种进程提供了新的思路,利用分子标记技术对重要的农艺性状进行标记可更为准确快速,并对育种和基因克隆提供理论依据。建立合适的分子标记技术及辅助育种平台,对利用分子标记辅助育种,构建遗传图谱以及基因的定位克隆都具有重要的意义。目前国内在对甜瓜农艺性状进行分子标记方面的研究较少,本研究以新疆甜瓜为研究对象,通过对AFLP（扩增片段长度多态性）标记技术中的几个关键参数进行优化,建立了成熟的适合新疆甜瓜的AFLP技术体系,并初步筛选了果实绿色条纹性状的AFLP标记。主要研究结果如下:1.通过反复试验,采用改进后的CTAB法提取的新疆甜瓜基因组DNA质量好,符合AFLP反应要求;2.通过对酶切时间及各步扩增中模板的稀释倍数等进行研究,建立了适于新疆甜瓜分析的AFLP银染技术体系。双酶切必须完全彻底,基因组DNA300ng用EcoR I和Mse I各3U,37℃酶切5h;连接产物稀释10倍用于预扩增;预扩增产物的稀释75倍后进行选择性扩增;6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测多态性;3.利用64对选择性引物组合对两亲本新疆甜瓜自交系k4-13和k4-15进行AFLP多态性分析。64对引物组合扩增条带总数为3622条,其中多态性带881条,占总条带数的24.3%。本研究筛选出扩增带型清晰,多态性丰富的引物组合14对;4.以新疆甜瓜自交系k4-13和k4-15配置杂交组合,构建F2代分离群体,通过AFLP-BSA技术初步筛选到果实绿色条纹性状的6个AFLP标记。本研究填补了新疆在甜瓜分子标记研究方面的空白,为新疆甜瓜分子标记辅助育种创建了一个重要的技术平台,对新疆甜瓜优质品种选育具有指导意义,这将为新疆甜瓜功能基因的克隆和应用、分子遗传图谱的构建以及遗传多样性的研究奠定坚实基础,从而加快新疆甜瓜分子育种的进程,具有重要的理论意义与应用价值。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述
• 1 遗传标记技术概述
• 1.1 形态标记（Morphological Markers）
• 1.2 细胞学标记（Cytological markers）
• 1.3 生化标记（Biochemical markers）
• 1.4 DNA 分子标记
• 1.4.1 RFLP 标记
• 1.4.2 RAPD 标记
• 1.4.3 AFLP 标记
• 1.4.4 SCAR 标记
• 1.4.5 SSR 标记
• 1.4.6 ISSR 标记
• 1.4.7 VNTR 标记
• 1.4.8 RGA 标记
• 1.5 几种常用分子标记技术的比较
• 2 AFLP 标记技术在植物遗传育种中的应用
• 2.1 基因的定位与克隆
• 2.2 种质资源遗传多样性和亲缘关系鉴定
• 2.3 构建分子遗传连锁图谱
• 2.4 品种鉴定和指纹图谱构建
• 2.5 分子标记辅助育种
• 2.6 QTL 定位
• 3 分子标记在甜瓜上的应用和国内外研究进展
• 3.1 分子标记辅助选择
• 3.2 分子遗传图谱的构建
• 3.3 种质资源遗传多样性
• 3.4 品种和种子纯度鉴定
• 4 本研究的内容及意义
• 第二部分 实验
• 第一章 新疆甜瓜AFLP 反应体系的建立和优化
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料、试剂及主要仪器
• 1.1.1 植物材料
• 1.1.2 试剂
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 新疆甜瓜基因组DNA 的提取
• 1.2.2 DNA 浓度与质量测定
• 1.2.3 AFLP 反应体系的建立和优化
• 1.2.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 1.2.5 银染
• 2 结果与分析
• 2.1 甜瓜基因组DNA 的纯度和质量
• 2.2 影响AFLP 技术的因素
• 2.2.1 酶切时间对酶切效果的影响
• 2.2.2 连接产物的稀释倍数
• 2.2.3 预扩增产物的稀释倍数
• 2.3 新疆甜瓜AFLP 技术体系的建立
• 2.3.1 基因组DNA 的酶切
• 2.3.2 接头的连接
• 2.3.3 预扩增
• 2.3.4 选择性扩增
• 2.3.5 变性PAGE 电泳及银染
• 3 讨论
• 第二章 亲本间多态性引物组合的筛选
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 亲本
• 1.1.2 试剂和仪器
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第三章 新疆甜瓜果实绿色条纹性状AFLP 标记的初步筛选
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 基因组DNA 提取
• 1.2.2 果实性状鉴定
• 1.2.3 BSA 法建池
• 1.2.4 AFLP 标记分析
• 2 结果与分析
• 2 代基因组DNA 的提取'>2.1 F₂ 代基因组DNA 的提取
• 2.2 果实性状鉴定
• 2 群体为材料的AFLP-BSA 结果分析'>2.3 以k4-13×k4-15 的F₂ 群体为材料的AFLP-BSA 结果分析
• 3 讨论
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 附录 英文缩略语
• 在读期间发表论文
• 致谢