论文摘要
雌激素受体（ER）是核受体超家族的一员，是一种配体依赖性转录因子，与雌激素特异性结合，通过雌激素效应元件调节基因的转录，进而调节机体的生长、发育及生殖活动。本文通过5’RACE方法在原有ERα（1841bp）、ERβ1（2509bp）大部分序列的基础上，克隆了唐鱼ERα（TERα）和ERβ1（TERβ1）的5’末端的未知序列，并最终得到了唐鱼ERα和ERβ1的全长cDNA序列，分别为2186bp和2609bp，且最长开放读码框都编码606个氨基酸。利用PCR、5’RACE、3’RACE方法成功克隆得到唐鱼ERβ2（TERβ2）基因的cDNA全长序列，长1939bp，最长开放读码框编码553个氨基酸。序列同源性及系统进化树分析表明此三种基因均属于雌激素受体家族，且分类、命名与其他哺乳类和鱼类一致。预测分析序列结构，TERα、TERβ1和TERβ2的一级结构都与其他激素核受体超家族相同，从N端到C端依次分为A／B、C、D、E和F六个功能结构域。其中C区和E区高度保守，分别为DNA结合区和配体结合区，且C区具有每个雌激素受体C区所特有的两个锌指结构。Northern blot分析表明：TERα主要在雌鱼的肝脏中有表达，且存在8.81kb和3.63kb两种转录形式。采用半定量RT-PCR方法，进一步分析检测了TERα、TERβ1、TERβ2在雌雄唐鱼各组织的表达，结果表明：他们不仅存在明显的性别二性型，也存在组织特异性。TERα主要在雌鱼的肝脏、卵巢及雄鱼的脑表达，在雌鱼的脑、鳃、肠也有微量的表达。TERβ1则在检测的每个组织都有表达，在雌鱼各组织的表达量普遍较高，其中最高的依次是肾、肝、肠、卵巢、鳃；而在雄鱼中，各组织的表达量存在较大差异，表达量高的依次是精巢、肾、肠和肝，骨中也有较高表达，脑、眼、肌中也有低量表达，在鳃中则仅有微量表达。TERβ2在雌鱼的鳃、肌、骨三组织没有表达，肾组织中表达量最高，其次是肝和肠，卵巢、眼和脑中也有低量表达；雄鱼的眼、鳃、肌三组织未检测到TERβ2的表达，肝、肠、肾及精巢中表达量都很高，从高到低依次是精巢、肠、肝、肾，在骨与脑中则仅有低量的表达。半定量RT-PCR分析雄性唐鱼在雌二醇诱导后肝脏中TERβ2的表达情况得知：溶剂酒精对照组TERβ2的相对表达量高于空白雄鱼组，由此可知，水溶液中酒精的存在对TERβ2基因的表达有上调作用。高浓度E2（100ng／L）处理组（同时存在酒精对照组一样的酒精浓度）的TERβ2相对表达量明显低于酒精处理组，也低于空白雄鱼组。所以，水溶液中100ng／L的E2会抑制TERβ2基因的表达，而且其抑制作用要大过0.01％体积分数酒精的诱导作用，因其综合作用是抑制TERβ2的表达。