星形胶质细胞介导的ENT1及ADK在颞叶癫痫大鼠海马中的动态表达及相关性研究

论文摘要

目的：观察星形胶质细胞介导的平衡核苷转运体1（equilibrative nucleoside transporters1, ENT1）及腺苷激酶（adenosine kinase, ADK）在颞叶癫痫大鼠模型不同时期海马中的动态表达及其相关性,探讨其在癫痫发病过程中作用。方法：按照随机的原理将6-8周龄健康雄性SD大鼠84只,随机分为实验组（n=60）、对照组（NS组）（n=12）及正常组（n=12）。实验组予以腹腔注射氯化锂-匹罗卡品建立颞叶癫痫模型；NS组予以腹腔注射等剂量无菌生理盐水；正常组未予特殊处理。实验组又根据癫痫急性期、潜伏期、慢性期按观察时间点分为5个亚组,即癫痫持续状态（status epilepticus, SE）后2小时（2h）、1天（1d）、7天（7d）、15天（15d）及30天（30d）,每亚组各12只。以上各小组再随机分为2个小组,每小组6只大鼠,分别进行：1. Western blot方法检测ENT1及ADK在海马中的表达；2.免疫组织化学检测各组大鼠海马不同区域（CA1区、CA3区、DG区）ENT1及ADK的表达及免疫荧光双标法检测星形胶质细胞介导的海马ENT1及ADK的表达变化。结果：1.实验组大鼠SE诱发成功率86.7%,死亡率为18.3%,模型成功率为68.3%。2.实验组大鼠海马ENT1蛋白表达：ENT1蛋白的表达在SE后2小时显著下调（p<0.01）,1天后有所恢复,但仍低于正常水平（P<0.01）后继续上调,至SE后7天恢复至正常水平（p>0.05）,15天明显上调（p<0.01）,30天达到高峰（p<0.01）。3.实验组大鼠海马ADK蛋白表达：ADK蛋白的表达在SE后2小时表达下调（p<0.01）,1天后恢复至正常水平（p>0.05）后进行性上升,30天达到高峰（p<0.01）。4.各组大鼠海马不同区域均可检测到ENT1及ADK的表达,且其表达量随SE后不同时期发生改变：在SE后2h下调（p<0.01）,后随着时间推移,ENT1及ADK表达上调。5.各组大鼠海马CA1区均可检测到星形胶质细胞与ENT1及ADK共表达,且在SE后2h下调（p<0.01）,后随着时间推移,星形胶质细胞增生,ENT1及ADK表达上调。结论：1.在颞叶癫痫大鼠海马组织中：急性期,ENT1及ADK表达下调；慢性期,ENT1及ADK表达上调,两者呈正相关。2.星形胶质细胞通过ENT1及ADK的表达变化调节突触间隙腺苷水平可能是癫痫的发病机制之一。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果观察和判断标准
• 第三章 结果
• 3.1 氯化锂-匹罗卡品致痫模型及其行为学变化
• 3.2 SE后不同时期海马组织ENT1及ADK的蛋白表达变化
• 3.3 SE后不同时期海马各区ENT1及ADK的表达
• 3.4 SE后不同时期海马CA1区星形胶质细胞介导的ENT1及ADK表达变化
• 第四章 讨论
• 4.1 氯化锂-匹罗卡品致痫动物模型
• 4.2 氯化锂-匹罗卡品癫痫模型诱发SE后海马ENT1的表达变化
• 4.3 氯化锂-匹罗卡品癫痫模型诱发SE后海马ADK的表达变化
• 4.4 ENT1及ADK在颞叶癫痫大鼠模型中的作用机制
• 4.5 本实验的局限性及下一步设想
• 第五章 结论
• 参考文献
• Review
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表论文