论文摘要
第一部分小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞化疗增敏作用目的:研究小白菊内酯（parthenolide,PTL）联合阿霉素（ADM）或地塞米松（Dex）抗多发性骨髓瘤细胞的作用。方法:采用多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞为研究对象,将PTL（0、0.5、1、2μmol/L）分别与ADM（0、0.01563、0.03125、0.0625、0.0125、0.25、0.5、1、2、4、8μmol/L）、Dex（0、0.001、0.005、0.025、0.125、0.625μmol/L）,作用不同时间（48h、72h）,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析细胞增殖;Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,荧光显微镜下观察丫啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色后的细胞形态变化。结果:（1）ADM单用48h,RPMI8226细胞的IC50为0.55±0.06μmol/L,与PTL（0.5、1、2μmol/L）联用后,分别降低为0.51±0.04μmol/L、0.28±0.03μmol/L（p<0.05）、0.25±0.02μmol/L （p<0.05）;与1μmol/LPTL联用（72h）MM细胞的增殖率由单用Dex（0.005μmol/L）时54±0.9%降至36±1% （p<0.01）。（2）药物作用48h后,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,空白对照组5±0.63%,单用PTL （2μmol/L）15±3%,单用ADM（0.25μmol/L）20±2.5%,两者联合作用增加为50±7%（与各单用组比,p<0.05）。AO/EB染色荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化。结论:PTL可增强ADM、Dex的抗骨髓瘤增殖作用,其增敏效应与增强对MM细胞的凋亡诱导作用有关。第二部分小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞化疗增敏作用机制研究目的:目前MM尚缺乏有效的治疗手段。主要的治疗方法是化疗,但化疗副作用比较大,且MM患者容易出现耐药。在上一部分的实验中我们发现PTL对MM细胞有化疗增敏效应,有可能改善MM患者的上述情况。故本部分进一步探讨PTL化疗增敏作用的可能机制,并为以后研究MM的增敏药物提供提示。方法:以各种浓度梯度PTL及阿霉素（ADM）作用RPMI8226细胞6h后,凝胶蛋白迁移率实验（EMSA）检测核因子κB（NFκB）的活性;48h后,RT-PCR检测细胞Bcl-2、Fas、Survivin mRNA的表达。结果:PTL可浓度依赖地抑制MM细胞的NFκB活性,1μmol/L以上作用6h可以明显抑制MM细胞的NFκB活性。ADM则能诱导MM细胞NFκB激活,2μmol/L ADM作用6h可使活性增高一倍,而1μmol/L PTL则能抑制其活性诱导作用;0.5～8μmol/L PTL可浓度依赖地抑制Bcl-2、Survivin mRNA的表达,但对Fas表达无明显影响。结论:PTL可通过抑制MM细胞自身及药物诱导的NFκB活性,下调抗凋亡基因的表达,促进细胞凋亡,增强药物敏感性。