广西家蚕血液型脓病及生物药物防治的研究

论文摘要

家蚕(Bombyx mori)血液型脓病,是由病原体——家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)所引起的一种传染性蚕病,又称家蚕核型多角体病,具有传染性强、发病急的特点,严重危害桑蚕业的发展。以广西现行用夏秋蚕品种“两广二号”为试验种群,本文通过大量室内试验并结合生产调查,系统研究了BmNPV病毒多角体及病毒粒子的分子结构、病毒对家蚕的致病力以及与之相关的三个主要结构蛋白基因的核苷酸序列、鸡免疫卵黄抗体的制备及其结合BmNPV甲醛灭活疫苗以及萘啶酮酸配置而成的复合生物药物对家蚕血液型脓病的预防效果。所获主要结果如下:1、对家蚕核型多角度病毒进行了扩增提纯,借助光学显微镜和电镜观察显微摄影,首次获得了广西家蚕BmNPV病毒株多角体和病毒粒子的电镜扫描照片。2、对该病毒的三个主要结构基因gp64、polh、p10进行了克隆和序列测定,确定了其与同类病毒之间的亲缘关系,广西流行的毒株与广州的亲缘关系最近。这些分子流行病学方面的初步探讨,为有效防治家蚕血液型脓病奠定了一定的理论基础。3、测定了该病毒的半数致死浓度及其与家蚕龄期的关系,进一步确定了该病毒的致病特点,首次确定了BmNPV对“两广二号”的半数致死浓度;同时对该病在蚕座内传染的规律进行了研究,发现饲养密度与感染率显著相关。4、制备了抗家蚕血液型脓病的鸡免疫卵黄抗体液,确定了免疫卵黄抗体及其与萘啶酮酸和BmNPV甲醛灭活疫苗配置而成免疫复合生物药物对家蚕血液型脓病有一定的预防效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 概述
• 1.2 家蚕核型多角体病毒主要研究进展
• 1.2 家蚕血液型脓病主要研究进展
• 1.3 鸡免疫卵黄抗体防治家畜家禽疾病的主要研究进展
• 1.4 氟喹诺酮类抗菌药物在防治家畜家禽疾病的主要研究进展
• 1.5 本研究的目的意义
• 1.6 本研究的主要内容
• 2 BmNPV病毒的扩增与形态结构的观察
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 生物材料
• 2.1.2 主要试剂及配置
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 试验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 BmNPV多角体的形态、大小
• 2.2.2 BmNPV病毒粒子的形态、大小
• 2.3 小结
• 3 BmNPV病毒三个主要结构基因的克隆及序列分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 生物材料
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要试剂
• 3.1.4 培养基及配制
• 3.1.5 质粒提取的试剂及制备
• 3.1.6 感受态细胞的试剂及配制
• 3.1.7 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 基因gp64扩增结果
• 3.2.2 基因polh扩增结果
• 3.2.3 基因p10扩增结果
• 3.2.4 重组质粒酶切鉴定结果
• 3.2.5 测序结果（完整的ORF）
• 3.2.6 与已发表序列比较结果
• 3.3 小结
• 4 BmNPV对家蚕的致病力及蚕座内传染的规律性研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 生物材料
• 4.1.2 主要仪器
• 4.1.3 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 BmNPV对家蚕不同龄期的致病力
• 50值检验'>4.2.2 BmNPV对家蚕的LC₅₀值检验
• 4.2.3 蚕座密度相同时，病蚕的不同混育比例与血液型脓病蚕座内传染的关系
• 4.2.4 病蚕混入比例相同时，不同饲育密度与血液型脓病蚕座内传染的关系
• 4.3 小结
• 5 抗BmNPV鸡免疫卵黄抗体的制备与预防效果研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 生物材料
• 5.1.2 试验器材
• 5.1.3 主要仪器
• 5.1.4 主要试剂
• 5.1.5 间接ELISA主要试剂及配置
• 5.1.6 试验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 鸡免疫卵黄抗体蛋白的含量与效价
• 5.2.2 鸡免疫卵黄抗体对家蚕血液型脓病的预防效果
• 5.2.3 鸡免疫卵黄抗体对家蚕血液型脓病的抑制效果
• 5.2.4 鸡免疫卵黄抗体对家蚕的安全性试验结果
• 5.3 小结
• 6 萘啶酮酸对BmNPV的预防效果研究
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 生物材料
• 6.1.2 主要试剂
• 6.1.3 主要仪器
• 6.1.4 试验方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 萘啶酮酸对家蚕血液型脓病的预防效果
• 6.2.2 萘啶酮酸对家蚕血液型脓病的抑制效果
• 6.2.3 萘啶酮酸对家蚕的安全性试验结果
• 6.3 小结
• 7 鸡免疫卵黄抗体和萘啶酮酸对BmNPV的联合预防效果研究
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 生物材料
• 7.1.2 主要试剂
• 7.1.3 主要仪器
• 7.1.4 试验方法
• 7.2 结果与分析
• 7.3 小结
• 8 全文结论与讨论
• 8.1 全文结论
• 8.2 全文讨论
• 8.3 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录