论文摘要
大肠癌（colorectal cancer, CRC）是常见的消化道肿瘤,通过检测并切除腺瘤性息肉能有效的降低大肠癌发病率,而且,如果检测到的大肠癌仍然为局限性病变,那么治疗后生存率较高。大肠癌筛查的目的是通过减少高级病变来减低死亡率。目前,有许多大肠癌筛查手段,最终可以分为两大类,一类是粪便检测,包括粪便隐血试验和粪便DNA检测,另一类为结构性检测。粪便检测最适合于检测癌症,也能发现一部分高级腺瘤,而粪便检测当中粪便DNA检测有着更高的敏感性与特异性。OSMR是肿瘤抑瘤素M（OSM）的受体,OSM属于IL-6家族,一般认为IL-6型细胞因子能够抑制肿瘤细胞。最初发现OSM能够抑制体外黑色素瘤细胞的生长,还能抑制包括肺癌、卵巢癌和乳腺肿瘤的生长。OSM的介导的生物学效应是由gp130和osmr形成的异二聚体介导的,目前有研究表明,在转移的黑色素瘤细胞中,OSM失去对细胞生长的控制是由于异常的组蛋白修饰导致OSMR基因的表观遗传沉默,癌组织中OSMR的水平是降低的。组织因子途径抑制剂（tissue factor pathway inhibitor, TFPI2）,个Kunitz-type丝氨酸蛋白酶抑制剂,能够抑制癌细胞的细胞外基质（ECM）的降解及癌细胞体外克隆形成和增殖。TFPI2功能的丧失使细胞易于发生侵袭,这可能是其参与癌症后期发展的重要方式。表观遗传（epigenetics）是指不涉及基因组DNA序列的改变而在细胞分裂中可以遗传给子代细胞的基因组修饰。DNA甲基化及组蛋白乙酰化修饰是表观遗传修饰的主要方式。DNA甲基化改变常常是恶性肿瘤发生发展过程中的早期事件,而且表观遗传事件发生的几率要高于遗传事件,对其进行检测可能会获得较高的敏感性与特异性。目的探讨检测人粪便中Oncostatin M Receptor （OSMR）基因和tissue factor pathway inhibitor （TFPI2）基因甲基化对于大肠癌及腺瘤诊断的可行性及临床意义。材料与方法从2009年5月到2010年9月,我们选取77个来自郑大一附院的患者,包括60例结直肠癌患者和17例腺瘤患者及30例正常对照,所有标本都经过病理证实,30例年龄匹配的健康人为正常对照组,全结肠镜检查均显示全结肠粘膜未发现异常。粪便标本于术前或内镜检查前矿收集,收集后立即送至实验室,置-70℃冰箱保存。对标本进行预处理后,用QlAamp DNA Stool Mini kit （QIAGEN,德国）试剂盒提取DNA并保存-20℃冰箱中。再按照EpiTect Bisulfite Kit（Qiagen）试剂盒操作说明书,进行DNA的亚硫酸氢盐修饰和纯化,置-20℃冰箱保存备用。以重亚硫酸氢盐修饰后的DNA作为甲基化特异性PCR的模板,检测TFPI2和OSMR基因甲基化状态。实验结果采用SPSS15.0统计软件处理,基因频率采用直接计数法,各组间率的比较采用X2检验。检验结果以P<0.05有统计学意义。结果1.60例大肠癌患者粪便中OSMR及TFPI2基因甲基化检出率分别为35%（21/60）和70% （42/60）;17例腺瘤患者粪便OSMR及TFPI2基因甲基化检出率分别为12%（2/17）和18%（3/17）：二者联合检测大肠癌阳性率为85%（5l/60）30例正常对照粪便中OSMR基因、TFPI2基因甲基化检出率为7%（2/30）和3%（1/30）。2.TFPI2基因甲基化状态改变与患者性别和肿瘤发生部位没有明显的相关性（P>0.05）。3. OSMR基因甲基化状态改变与患者性别和肿瘤发生部位及duke分期没有明显的相关性（P>0.05）。4. TFPI2基因启动子区甲基化在Dukes分期A、B和C、D期中发生率分别为57%和81%,差异显著（P<0.05）；低分化肿瘤组织中TFPI2基因启动子甲基化发生率为86%,中、高分化肿瘤组织中TFPI2基因启动子甲基化发生率为61%,二者差异显著（P<0.05）。5.低分化肿瘤组织中OSMR基因启动子甲基化发生率为55%,中、高分化肿瘤组织中OSMR基因启动子甲基化发生率为24%,二者差异非常显著（P<0.05）。结论1. TFPI2和OSMR基因甲基化检测可能成为大肠癌无创诊断的分子标志物之一。2. TFPI2基因甲基化的阳性状态与大肠癌患者的肿瘤Dukes分期和肿瘤组织分化程度明显相关,与大肠癌患者的性别和肿瘤部位无明显相关。3. OSMR基因甲基化的阳性状态与大肠癌患者的组织分化程度明显相关性,与大肠癌患者的肿瘤Dukes分期、部位和组织分化程度无明显相关性。
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标签：大肠癌论文; 组织因子途径抑制物论文; 甲基化特异性论文; 粪便论文;