5类中药新药开郁宁片的制备工艺及质量标准研究

论文摘要

目的：按照中药5类新药注册申报的相关规定，对贯叶金丝桃有效部位药学研究部分的主要内容进行了研究，为建立制定贯叶金丝桃有效部位的制备工艺、开郁宁片的成型工艺、贯叶金丝桃药材总黄酮的含量测定方法及贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的质量标准，提供方法学的研究基础条件及数据。方法：用单因素考察实验和L9（34）的正交实验研究方法，对贯叶金丝桃有效部位中的乙醇粗提、乙酸乙酯回流提取、大孔树脂纯化及干燥等提取制备工艺条件，开郁宁片的粘合剂、崩解剂、润滑剂及助流剂的类型及用量等制剂成型工艺条件，进行了优化研究。用薄层色谱法、高效液相色谱法及紫外-分光光度法对贯叶金丝桃、贯叶金丝桃提取物和开郁宁片中的芦丁、槲皮素、金丝桃苷及总黄酮，进行了定性定量的研究。结果：确定贯叶金丝桃提取物提取工艺为：50％乙醇回流提取3次，每次10倍量50％乙醇，回流1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，干燥，粉碎，得贯叶金丝桃醇浸膏粉，加乙酸乙酯回流提取三次，每次10倍量乙酸乙酯，回流提取1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，得乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取残留浸膏粉加10倍量蒸馏水60℃加热溶解，减压浓缩至原体积的0.8倍量，冷至室温，滤过，滤液通过已处理好的D101大孔树脂柱，再用水及40％乙醇洗脱，收集第二和第三个柱体积40％乙醇的洗脱液，减压浓缩，得40％乙醇洗脱物。将乙酸乙酯提取物和40％乙醇洗脱物混匀，于60℃减压干燥24小时，粉碎，过80目筛，即得贯叶金丝桃提取物，其收得率为6.04％，总黄酮转移率为51.66％，金丝桃苷转移率为56.94％。贯叶金丝桃提取物按5：3的比例加入微晶纤维素及适量50％乙醇混匀，制粒，干燥，再加入23％羧甲基淀粉钠、0.5％硬脂酸镁、1.5％滑石粉时，压制素片。加入4％的GAIEB12E包衣材料包衣，即得开郁宁片。芦丁、金丝桃苷、槲皮素为对照品，于聚酰胺薄膜片上以乙醇-甲酸（50：1）展开，三氯化铝试液显色，对贯叶金丝桃提取物及开郁宁片检识，紫外灯（365nm）下，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上均清晰出现相同颜色斑点。贯叶金丝桃、贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的总黄酮含量测定方法选用分光光度法，检测波长为500nm，以芦丁为对照品绘制标准曲线，经对贯叶金丝桃、贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的六个批次进行测定计算，贯叶金丝桃、贯叶金丝桃提取物及开郁宁片总黄酮含量以无水芦丁计分别不低于63mg／g、630mg／g及80mg／片。贯叶金丝桃提取物及开郁宁片中的黄酮单体化合物含量测定方法选用高效液相色谱法，以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱；检测波长为254nm，经对贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的六个批次进行测定计算，贯叶金丝桃提取物的芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量分别不低于5％、3.5％和3.5％，开郁宁片的分别不低于6.2mg／片、4.3mg／片和4.5mg／片。结论：按贯叶金丝桃的提取制备工艺和开郁宁片的制剂成型工艺进行三次中试，其收得率为6.04％，总黄酮转移率为51.66％，崩解时限为40分钟，片重差异为4.0％，三批中试结果表明，该工艺制备开郁宁片，具有工艺较为简便且稳定可行，具有提取物收得率及总黄酮含量较高的特点，可供大规模生产使用。六个批次的贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的芦丁、金丝桃苷和槲皮素的薄层色谱定性分析结果表明，其斑点清晰，分离度、专属性及重现性均较好。分光光度法对总黄酮进行含量测定的方法学研究结果显示，其相关系数为0.9992，贯叶金丝桃、贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的平均回收率分别为98.46％（RSD 1.95％），97.9％（RSD 2.18％）和97.1％（RSD 1.42％）。高效液相色谱法对芦丁、金丝桃苷、槲皮素进行含量测定的方法学研究结果显示，其相关系数分别为0.99994、0.99999和0.99999，贯叶金丝桃提取物中这3个单体化合物的平均回收率分别和99.09％（RSD 1.29％），98.87％（RSD 1.81％）和99.39％（RSD 0.61％）；开郁宁片中这3个单体化合物的平均回收率分别99.84％（RSD 0.26％），98.98％（RSD 1.11％）和99.79％（RSD为0.97％）。上述方法学测定结果表明，本文所研究的定性定量方法准确度及精密度均符合新药评审相关规定，具有操作简单，快速方便的特点，可供制定贯叶金丝桃提取物和开郁宁片的质量标准采纳使用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 贯叶金丝桃提取物制备工艺研究
• 1 制备工艺
• 2 制备工艺的优化研究
• 3 小结与讨论
• 第二部分 开郁宁片制剂成型工艺研究
• 1 实验材料
• 2 方法与结果
• 3 小结与讨论
• 第三部分 贯叶金丝桃药材总黄酮含量测定研究
• 1 实验材料
• 2 方法与结果
• 3 小结与讨论
• 第四部分 贯叶金丝桃提取物的质量标准研究
• 1 贯叶金丝桃提取物的质量标准（草案）
• 2 贯叶金丝桃提取物的质量标准（草案）说明
• 3 小结与讨论
• 第五部分 开郁宁片的质量标准研究
• 1 开郁宁片的质量标准（草案）
• 2 开郁宁片的质量标准（草案）说明
• 3 小结与讨论
• 第六部分 贯叶金丝桃化学成分、药理作用、临床应用及生药学研究概况
• 1 化学成分
• 2 贯叶连翘的药理作用
• 3 贯叶连翘的临床应用
• 4 贯叶连翘的生药学研究
• 5 结语与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附图