食管癌高危人群食管上皮内炎症细胞浸润与上皮增生关系及HPV感染的初步研究

论文摘要

背景与目的南部沿海潮汕地区和内陆太行山区是中国两大食管癌高发区。其中近十年潮汕地区南澳岛食管癌贲门癌的发病率为109.5／10万，太行山区林州市1995-2004年食管癌发病率为83.2／10万。本课题组前期通过遗传流行病学调查、分子遗传学等研究发现潮汕人群与内陆太行山人群具有密切的血缘关系。本课题组已经对潮汕地区食管慢性炎症与食管癌关系进行了研究，但标本限于食管癌手术后组织，炎症与肿瘤的因果关系仍存在争议。2005年10月本课题组有幸协助参与太行山区林州市食管癌普查工作，借此机会对此地高危人群的食管上皮内炎细胞浸润与上皮增生的关系进行初步研究。慢性食管炎为食管癌高发区高危人群中常见的食管疾病。有研究发现高发区人群的慢性食管炎的患病率明显高于低发区。在伴有食管炎的人群中，食管上皮的单纯性增生和非典型增生更为常见。本课题组通过对慢性炎症和基底膜关系的研究，发现炎症细胞与基底膜损伤以及上皮的增殖存在一定的关系，通过对人类白细胞分化抗原的免疫组化检测，证实食管粘膜上皮内浸润的淋巴细胞主要为T淋巴细胞。HLA-DR为HLA-Ⅱ类分子DR抗原，在免疫应答和免疫调节机制中起重要作用。HLA-DR主要存在于活化的T细胞、血管内皮细胞、B细胞和抗原提呈细胞，外周血淋巴细胞HLA-DR表达的程度可以反映T细胞的活化状态。食管炎症与食管肿瘤的关系的研究多集中于Barret’s食管和食管腺癌以及肿瘤免疫方面。食管炎症细胞浸润与食管增生或鳞癌的关系较少有人关注。自1982年，Syijanen提出HPV与食管癌的发生有关以来，许多研究认为HPV可能与某些高发区的食管癌的发生有关，但是检出率差异较大。而且在食管癌组织、癌旁粘膜组织和正常组织中，HPV的感染情况有所不同。本实验旨在观察食管上皮内浸润的炎症细胞数目与上皮增生程度的关系，并以CD3和HLA-DR作为观察指标，初步研究T细胞以及活化的T细胞对上皮增生的作用。通过免疫组化和DNA分子原位杂交两种方法，初步检测食管癌高危人群的食管上皮的HPV感染情况。材料与方法标本来源本课题组于2005．10月～2005．12月参与并协助河南省林州市肿瘤医院开展的食管癌高危人群内镜普查工作。利用内镜获取1480例食管上皮活检标本。高危人群来自林州市合涧乡自愿接受普查的1480例无明显症状的常住居民。年龄在40-70之间，男性558例，女性922例。标本取材步骤：纤维胃镜自上而下检查食管至胃十二指肠，对贲门或胃内可疑病变部位钳取病变组织，然后碘染法使食管着色，针对染色可疑处多点钳取食管组织。研究方法1．对1480例食管上皮组织进行石蜡包埋和H．E染色、病理学诊断；分析其病变特点。选取301例食管上皮（正常140例，单纯增生80例，非典型增生80例），重点观察每例样本中浸润上皮内的炎症细胞数目与上皮增生之间的关系。2．采用免疫组织化学EnVision二步法分别对炎症细胞的CD3、HLA-DR表达进行检测；分别进行浸润上皮内的CD3、HLA-DR阳性细胞计数。观察T淋巴细胞浸润数量以及其活化情况与上皮增生之间的关系。3．采用免疫组织化学EnVision二步法对HPV衣壳蛋白进行染色；利用HPV广谱型DNA分子探针，采用DNA原位分子杂交方法对组织HPV感染情况进行检测。结果1．在1480例食管上皮中，正常上皮为911例（61.55％），明显的炎症76例（5.14％），单纯增生96例（6.49％），轻度非典型增生329例（22.23％），中度非典型增生39例（2.64％），重度非典型增生上皮17例（1.15％），癌7例（0.47％）。随着年龄升高，炎症、非典型增生以及癌症的发生率逐渐增高（p＜0.05）。上皮内炎症细胞浸润数目在单纯增生和非典型增生上皮中均明显高于正常上皮（p＜0.05）。炎症细胞数＞10（具有炎症趋势）的比例在正常、单纯增生和各级非典型增生中的分布呈逐渐升高的趋势，且在重度非典型增生上皮中比例最高。2．与正常食管上皮比较，单纯增生和非典型增生上皮内浸润的CD3+T细胞数量均增多。且其差异有明显的统计学意义（p＜0.05）。上皮内HLA-DR标记的炎症细胞数目与CD3标记炎症细胞数目成正相关（p＜0.05）。与HLA-DR表达阴性的上皮相比，HLA-DR表达阳性的食管上皮中浸润的CD3+细胞数目明显增多（p＜0.05）。上皮内浸润HLA-DR+炎症细胞数目在非典型增生中较正常升高，其差异有统计学意义（p＞0.05）。3．在228例食管上皮中未见明显的HPV衣壳蛋白阳性表达。在228例食管上皮中，75例检测到HPV DNA，HPV阳性率为32.9％（75／228）。结论1．在内镜普查中，非典型增生上皮和鳞状细胞癌检出率提示了其对于高发区食管癌的早防早治具有一定的积极意义。食管癌高危人群食管粘膜上皮炎症、上皮非典型增生以及癌的检出率随着年龄的增长逐渐增高。食管癌高危人群食管上皮内浸润炎症细胞的数目与食管上皮的增生程度有较为密切的联系。2．上皮内浸润的T细胞数目与上皮的增生程度有明显的关系；T细胞可能在上皮增生过程中起着一定的作用。HLA-DR标记的活性T细胞的数目与CD3+T细胞数目呈正相关。HLA-DR标记的活性T细胞在上皮从正常到非典型增生的转变过程中起着一定的作用。3．在高发区228例食管上皮石蜡组织中的HPV检测中，HPVDNA原位分子杂交具有较高的敏感性，为32.9％（75／228）。

论文目录

• 缩略词释义
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 食管癌高危人群上皮浸润炎细胞与上皮增生之间的关系
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 食管上皮内T细胞浸润以及HLA-DR标记活化T细胞与上皮增生的关系
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 食管癌高危人群食管上皮HPV检测的初步研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 致谢
• 研究生期间发表文章题录