论文摘要
第一部分阿霉素聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的制备及载药研究目的:制备阿霉素（doxorubicin,DOX）聚氰基丙烯酸丁酯（ polybutylcyanoacrylate, PBCA）纳米粒（DOX-PBCA-NP）,并对其进行测定。方法:应用乳化聚合法制备DOX-PBCA-NP,用正交设计优选DOX-PBCA-NP的制备条件。纳米粒的粒径及分布用马尔文激光粒度分析仪测试,透射电镜（TEM）观察纳米粒形态、大小,紫外分光光度法在波长481nm处测定纳米粒中DOX的载药量和包封率。结果:激光粒度分析仪测定纳米粒的平均粒径为120nm（载药）、100（空白）,多分散系数（Polydispersity Index）为0.12。TEM下,纳米粒呈圆形,无粘连,纳米粒的载药量与包封率分别为10.58%与87.43%。结论:应用乳化聚合的方法制备的纳米粒大小形态一致,性能稳定,可为进一步的体内和体外实验提供基础。第二部分阿霉素聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒抑制脑胶质瘤SHG44细胞的研究目的:制备阿霉素（doxorubicin）聚氰基丙烯酸丁酯（polybutylcyanoacrylate）纳米粒（DOX-PBCA-NP）,并研究其体外对脑胶质瘤SHG44的抑制作用。方法:乳化聚合法制备DOX-PBCA-NP;MTT法测定细胞抑制率;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）测定细胞凋亡和细胞周期的改变;倒置显微镜观察细胞生长情况;免疫组织化学法检测SHG44细胞端粒酶蛋白的表达。结果:1、用药24h后,DOX的三个不同浓度组（按DOX浓度分别为2μg/ml,5μg/ml,10μg/ml）对SHG44细胞的抑制率分别为:（32.3±0.2）%、（48.7±0.7）%、（67.1±0.4）%;DOX-PBCA-NP组分别为:（45.7±0.2）%、（61.6±0.4）%、（76.2±0.8）%;PBCA-NP组为（1.6±0.7）%。2、在DOX,DOX-PBCA-NP三个不同浓度组（按DOX浓度分别为2μg/ml,5μg/ml,10μg/ml）,DOX组细胞端粒酶蛋白阳性率分别为（86.4±3.7）%、75.6±2.1)%、（69.7±1.3）%,DOX-PBCA-NP组分别为（72.3±1.6）%、63.2±3.1)%、（55.2±0.8）%,各组端粒酶蛋白的表达阳性率均与对照组有显著性差异（P<0.01）。3、抑制效应表现为细胞周期改变明显,G1/Go期细胞增多,S期细胞明显减少,细胞凋亡增多,端粒酶蛋白表达明显下降。DOX组、DOX-PBCA-NP组与对照组比较均有显著性差异（P<0.01）,DOX-PBCA-NP组较DOX组对SHG44细胞的抑制效应更明显,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。。结论:阿霉素聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒与阿霉素比较,对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用明显增强。第三部分端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的制备及载药研究目的:制备端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（hTERT ASODN- PBCA-NP）,并测定其粒径大小、形态、Zeta电位等。方法:应用乳化聚合法制备hTERT ASODN-PBCA-NP,正交设计优选hTERT ASODN-PBCA-NP的制备条件。纳米粒的粒径及分布用马尔文激光粒度分析仪测试,透射电镜（TEM）观察纳米粒大小、形态,高效液相色谱法测定纳米粒中ASODN的载药量和包封率。结果:激光粒度分析仪测定纳米粒的平均粒径为120nm,多分散系数（Polydispersity Index）为0.11。TEM下,纳米粒呈圆形,颗粒间无粘连,纳米粒的载药量与包封率分别为71.17%与95.20 %,Zeta为+41.3mV。。结论:应用乳化聚合的方法制备的纳米粒大小形态一致,表面带正电荷,性能稳定,具有较高的载药量和包封率。第四部分端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒抑制脑胶质瘤SHG44细胞的研究目的:以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（polybutylcyanoacrylate nanoparticles, PBCA-NP）为载体,以端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucletide,ASODN）为目的基因体外转染脑胶质瘤SHG44细胞,研究其体外对SHG44细胞生长的抑制作用。方法:应用乳化聚合法制备端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（hTERT ASODN-PBCA-NP）,琼脂糖凝胶电泳法分析其对抗核酸酶的降解作用,MTT法检测细胞的生长抑制率;倒置显微镜观察细胞的生长状况;流式细胞仪（flow cytometry,FCM）测定细胞周期的改变以及5’-FITC标记的ASODN（FASODN-NP）转染后的细胞内荧光强度;免疫细胞化学法测定SHG44细胞端粒酶蛋白的表达,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果: 1、琼脂糖凝胶电泳结果表明ODN-PBCA-NP具有不被核酸酶降解的作用;转染后48h空白对照组、NP组、FASODN组和FASODN-NP组的胞内荧光道数分别为138.20,140.40,142.06和490.00,FASODN-NP组细胞内荧光强度增加,与其它各组相比有显著性差异（P<0.01）;2、hTERT mRNA表达的相对值在ASODN1-3-NP各组分别为1.45±0.11、1.39±0.22、1.43±0.14,空白对照组为（2.23±0.12）;3、端粒酶蛋白表达的阳性率在ASODN1-3各组分别为（53.1±1.8）%、（56.7±1.5）%和（59.6±4.3）%,空白对照组为（94.6±1.3）%;4、ASODN-NP组与空白对照组、SODN-NP组、ASODN组、NP组相比,SHG44细胞的抑制率、细胞周期的改变以及hTERT mRNA、端粒酶蛋白的表达均有显著性差异（P<0.05）,ASODN-NP组细胞在G1/G0期增多,S期细胞减少,hTERT mRNA、端粒酶蛋白的表达下降。结论: PBCA-NP为载体介导的hTERT-ASOND可以有效地透过细胞膜到达SHG44细胞内部,阻断hTERT mRNA的表达,抑制肿瘤细胞的生长。第五部分端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒体内治疗裸鼠脑胶质瘤动物模型的研究目的:以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（polybutylcyanoacrylate nanoparticles, PBCA-NP）为载体,以端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucletide,ASODN）为目的基因转染裸鼠脑胶质瘤动物模型,研究其体内对裸鼠脑胶质瘤动物模型的治疗作用。方法:制备裸鼠脑胶质瘤动物模型,尾静脉注射端粒酶反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒,测定裸鼠颅内肿瘤的大小;免疫组织化学法检测肿瘤组织端粒酶蛋白的表达、病理改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果:1、肿瘤组织端粒酶蛋白的阳性表达率在空白对照组为（92.6±2.7）%,NP组为（91.2±3.4）%,SODN-NP组为（94.7±1.3）%,ASODN组为（90.5±2.6）%,ASODN-NP组为（65.2±2.1）%;2、空白细胞对照组、NP组、SODN-NP组、ASODN组肿瘤组织hTERT mRNA表达的相对值分别为2.34±0.15、2.46±0.22、2.41±0.35、2.39±0.24,ASODN-NP组为1.56±0.39;3、ASODN-NP组与对照组、SODN-NP组、ASODN组、NP组相比,肿瘤体积、端粒酶蛋白的表达以及hTERT mRNA表达均有显著性差异（P<0.05）,ASODN-NP组肿瘤体积小,端粒酶蛋白、hTERT mRNA的表达下降。结论: PBCA-NP为载体介导的hTERT-ASOND在体内具有抑制裸鼠脑胶质瘤生长的作用。
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