Curcumin对阿尔茨海默病中APP的淀粉样酶切途径的调控作用

论文摘要

目的:研究发现Curcumin可以明显抑制Aβ的产生,具有防治阿尔茨海默病的作用,但其机制仍不明确。在淀粉样酶切途径中,APP经β-和γ-分泌酶作用产生Aβ。本课题旨在通过研究Curcumin作用于阿尔茨海默病中APP淀粉样酶切途径的环节,探讨其抑制Aβ产生的作用机制,为AD治疗的新途径提供重要实验依据。方法:体外培养神经系细胞SHSY5Y和非神经系细胞HEK293,以LipofectaminTM2000脂质体介导瞬时共转染pBACE1-mychis和pAPPswe两种质粒,Curcumin分浓度梯度（0、1.25、5、20μmol/L）处理转染后的SHSY5Y和HEK293 24h,以及5μmol/LCurcumin按时间梯度（0、12、24、48h）分别处理转染后的SHSY5Y和HEK293,然后通过RT-PCR检测APP和BACE1 mRNA水平,Western blot检测BACE1和C99蛋白表达情况,ELISA检测Aβ40/42水平。结果:RT-PCR显示,经Curcumin处理后在两种细胞系中APP和BACE1 mRNA表达水平都有明显减弱,呈浓度-时间依赖性（P<0.05）,且两种基因的表达在神经细胞SHSY5Y更显著（P<0.05）;Western blot结果表明,BACE1和C99蛋白表达也有不同程度的下调,呈浓度-时间依赖性（P<0.05）;ELISA结果显示,Aβ40/42表达水平明显降低,呈浓度-时间依赖性（P<0.05）。结论:Curcumin能够抑制AD相关基因APP mRNA表达;抑制APP的限速酶BACE1 mRNA和蛋白表达;并抑制APP分解产物C99蛋白表达,都呈浓度-时间依赖性（P<0.05）。此外,Curcumin可以明显抑制APP的分解底物Aβ40/42的产生。我们的研究表明:Curcumin可通过对APP淀粉样酶切途径的多个环节进行调控,从而显著抑制Aβ40/42的生成。本课题为找到AD治疗的新途径提供重要实验依据。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 材料和仪器
• 1.1 材料
• 1.2 实验仪器和设备
• 2 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 质粒扩增和提取
• 2.3 转染和 Curcumin 处理细胞
• 2.4 RT-PCR 检测 APP 和 BACE1mRNA 的表达
• 2.5 Western blot 方法检测 BACE1 和 C99 表达
• 2.6 ELISA 方法检测表达 Aβ40/Aβ42 的表达
• 3 结果
• 3.1 RT-PCR 检测 Curcumin 对转染后 HEK293 和 SHSY5Y 细胞 APP mRNA 表达情况
• 3.2 RT-PCR 检测 Curcumin 对转染后 HEK293 和 SHSY5Y 细胞 BACE1 mRNA 表达情况
• 3.3 Western blot 检测 Curcumin 对转染后 HEK293 和 SHSY5Y 细胞 BACE1 蛋白表达情况
• 3.4 Western blot 检测 Curcumin 对转染后 HEK293 和 SHSY5Y 细胞 C99 蛋白表达情况
• 3.5 ELISA 方法检测表达 Aβ40/Aβ42 的表达
• 4 讨论
• 参考文献
• 综述文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录