粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物学研究

论文题目: 粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物学研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 董佳里

导师: 张义正

关键词: 白腐真菌,粗毛栓菌,漆酶,发酵条件,同工酶谱,纯化,性质,基因克隆,基因表达,文库

文献来源: 四川大学

发表年度: 2005

论文摘要: 利用RB亮蓝平板检测方法发现,粗毛栓菌(Trametes gallica)有较强的漆酶产生能力,其显色反应明显强于黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。 对液体培养条件下粗毛栓菌产生漆酶的研究表明,2%以下的胰蛋白胨能明显促进漆酶的产生;高碳(1%葡萄糖)条件下产生的漆酶明显高于低碳条件;高浓度铜离子(200μmmol/L)能有效促进该菌漆酶的产生;胰蛋白胨-葡萄糖培养基(TG)和细菌用蛋白胨-2%葡萄糖培养基(PG)产生的漆酶活性最高。 研究了59种芳香类化合物对粗毛栓菌漆酶产生的影响,发现27种对漆酶产生有促进作用,其中对苯二酚作用最强;另外32种化合物在不同程度上抑制漆酶的产生,对硝基苯酚和2,6-二氯苯酚的抑制作用最强;不同取代基化合物、同分异构体化合物对漆酶产生表现出一定规律性,其中对位、邻位和间位的芳香化合物的促进产酶作用按对位>间位>邻位排列。 用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色法研究了12种培养基对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响。结果表明,不同培养基产生不同的漆酶同工酶谱。其中在振荡培养条件下,马铃薯提取物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(PAG)和氨基酸混合物-酒石酸铵-葡萄糖培养基(AAG)均可产生多达14条漆酶同工酶谱带,而在静置培养下的PAGⅠ培养基产生的同工酶带仅为4条。综合各种培养条件,粗毛栓菌产生的漆酶同工酶数目高达20种,是迄今发现产生漆酶种类最多的一种真菌。 通过硫酸铵沉淀,DEAE-sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析,Sephadex

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第一章 粗毛栓菌漆酶产生条件和同工酶谱研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 粗毛栓菌的RB亮蓝、鞣酸平板观察

3.2 碳源、氮源对粗毛栓菌漆酶产生的影响

3.3 铜离子对粗毛栓菌漆酶产生的影响

3.4 不同氮源培养基对粗毛栓菌漆酶产生的影响

3.5 芳香化合物对粗毛栓菌漆酶产生的影响

3.6 培养条件对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响

3.7 芳香化合物对粗毛栓菌漆酶同工酶谱的影响

3.8 培养条件对粗毛栓菌胞外蛋白质谱的影响

4 讨论

4.1 粗毛栓菌产生漆酶能力的初步鉴定

4.2 粗毛栓菌漆酶发酵条件研究

4.3 粗毛栓菌漆酶同工酶谱和蛋白质谱研究

小结

5 参考文献

第二章 粗毛栓菌漆酶同工酶的分离纯化和性质研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 漆酶的分离纯化

3.2 漆酶的生物物理性质研究

3.3 漆酶的生物化学性质研究

3.4 漆酶N-末端氨基酸序列的测定

4 讨论

4.1 漆酶的纯化方法

4.2 粗毛栓菌漆酶的生物物理性质

4.3 粗毛栓菌漆酶的生物化学性质

4.4 粗毛栓菌漆酶的N-末端氨基酸序列的同源性

小结

5 参考文献

第三章 粗毛栓菌漆酶基因编码序列的克隆和分析

摘要

1 引言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 粗毛栓菌漆酶基因克隆策略

3.2 粗毛栓菌漆酶基因克隆及鉴定

3.3 漆酶基因和cDNA片段的序列分析

3.4 漆酶基因编码区和cDNA片段之间的同源性分析

3.5 漆酶成熟肽编码区lacA的同源性分析

4 讨论

4.1 粗毛栓菌漆酶基因的克隆

4.2 粗毛栓菌漆酶基因多样性

4.3 lacA基因核苷酸序列构成

4.4 漆酶的氨基酸组成分析

4.5 密码子的偏爱性分析

小结

5 参考文献

第四章 粗毛栓菌漆酶cDNA在大肠杆菌中的表达和cDNA文库的构建

摘要

1 引言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 lacA基因在大肠杆菌中的融合表达

3.2 粗毛栓菌cDNA文库的构建

4 讨论

4.1 漆酶基因的异源表达

4.2 cDNA文库构建

4.3 关于粗毛栓菌漆酶研究的几点思考

小结

5 参考文献

文献综述 漆酶的研究进展

1 前言

2 各种生物产生的漆酶

2.1 植物中的漆酶

2.2 真菌漆酶

2.3 原核生物中的漆酶

2.4 其它生物中的漆酶

3 真菌漆酶研究进展

3.1 影响真菌漆酶发酵的因素

3.2 真菌漆酶同工酶多样性

3.3 真菌漆酶的物理化学性质

3.4 真菌漆酶的生理功能

3.5 真菌漆酶的分子生物学

3.6 真菌漆酶的应用

4 关于漆酶研究的展望

参考文献

致谢

在读期间发表及待发表论文情况

申明

发布时间: 2005-10-08

参考文献

• [1].粗糙脉孢菌漆酶基因的克隆、定点诱变及其在毕赤酵母中的表达[D]. 谌斌.江南大学2006
• [2].变色栓菌发酵产漆酶的过程优化[D]. 胡建华.中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)2017

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