论文摘要
本研究以露地菊（Dendranthema×gandiflorum）品系‘东林4号’、‘东林6号’、‘东林9号’和‘东林13号’为试验材料,研究了不同品系在渗透胁迫下的生理活性的改变。同时,建立了‘东林4号’、‘东林6号’、‘东林9号’叶片外植体再生体系;从拟南芥中克隆了P5CS基因,应用Gateway克隆技术构建了植物表达载体,并构建了P5CS基因在露地菊上的遗传转化体系,主要结果如下:1、露地菊抗渗透品系的筛选在盐碱胁迫条件下,‘东林4号’、‘东林9号’和‘东林13号’三个品系的耐盐性较强,‘东林6号’的耐盐性较差,无法适应高盐胁迫条件。在低温胁迫条件下,随着温度的降低,‘东林4号’、‘东林6号’、‘东林9号’、‘东林13号’4个品系都受到不同程度的低温伤害,‘东林4号’受低温影响最小。2、P5CS基因的克隆及植物表达载体的构建通过RT-PCR方法从拟南芥中克隆了PSCS的cDNA全长基因。利用Gateway克隆技术构建了P5CS基因的植物表达载体。3、露地菊P5CS基因的遗传转化建立‘东林4号’、‘东林6号’、‘东林9号’叶片外植体再生体系,发现不同基因型叶片外植体的分化率差异显著。‘东林9号’的叶片外植体分化率最高。‘东林4号’最适分化培养基为:MS+3 mg/L BA+0.1 mg/L 2,4-D,叶片分化率为10%;‘东林6号’最适分化培养基为:MS+2 mg/L BA+1mg/L NAA,叶片分化率为82%;‘东林9号’最适分化培养基为:MS+0.5 mg/L BA+1.5 mg/L NAA,该品系植株上层幼嫩叶片分化率为95%,中下层叶片分化率均小于50%;潮霉素对以叶片为外植体的分化起到很强的抑制作用,在潮霉素含量为5 mg/L的培养基中叶片即可失去分化能力。‘东林9号’品系组培再生芽在含有30 mg/L潮霉素的培养基中全部死亡。通过农杆菌LBA4404介导,初步建立了P5CS基因转入露地菊的遗传转化体系,经过PCR鉴定得到了一个阳性株系。