海洋放线菌筛选及其表征研究

论文摘要

在海洋的特殊环境中,海洋放线菌由于其独特的代谢途径和合成新颖抗生素的能力,这不仅确保其在极端环境中生存,也提供了产生新颖抗生素的潜力,因此研究海洋放线菌有着深远的意义。本文以大连海域采集的海水和海泥为研究对象,对海洋中的放线菌进行分离筛选、菌株的分类、发酵产物的抑菌活性及发酵条件优化进行研究。主要内容和结论如下：1.从大连星海湾、黑石礁、夏家河子等海域采集的海水和海泥样品中分离得到放线菌菌株33株,显示了海泥中蕴含了丰富的放线菌资源。2.对33株放线菌进行了形态特征的观察和描述,参照《伯杰细菌鉴定手册》进行鉴定,基本认为33株放线菌均有可能属于链霉菌属。3.对分离得到的33株放线菌进行琼脂打孔法初筛,7株菌具有抗菌活性物质,约占筛选出放线菌总量的21%。具有广谱抗菌活性的放线菌有3株,分别为D09,D25,D30,它们对金黄色葡萄球菌的抑制最为明显,其中D09的广谱抑菌效果最为显著。对具有抑菌效果的7株放线菌D09、D12、D19、D25、D30和D31进行了生理生化特性测试。4.通过对发酵培养基的条件优化确定了最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为硝酸钾。正交试验确定了发酵培养基配方为可溶性淀粉15g/L,KNO31g/L,K2HPO4·H2O0.25g/L,MgSO4·7H2O0.25g/L。摇瓶发酵产生抑菌活性物质的最适初始pH值为7,菌龄为48h,接种量为10%,最佳培养条件为25℃,装样量为10%,为最佳发酵工艺条件。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 海洋微生物概述
• 1.1.1 海洋微生物及其多样性
• 1.1.2 海洋微生物的生物活性物质
• 1.2 海洋放线菌概述
• 1.2.1 海洋放线菌
• 1.2.2 海洋放线菌的多样性
• 1.2.3 海洋放线菌的生物活性物质
• 1.2.3.1 抗肿瘤活性物质
• 1.2.3.2 抗菌活性物质
• 1.2.3.3 酶抑制剂
• 1.3 海洋放线菌的筛选方法
• 1.3.1 传统筛选方法
• 1.3.2 预处理技术
• 1.4 放线菌的分类系统及发展
• 1.4.1 传统分类
• 1.4.2 化学分类
• 1.4.3 分子生物学分类
• 1.4.3.1 DNA碱基组成比例的测定（G+C mol%）
• 1.4.3.2 DNA-DNA分子杂交
• 1.4.3.3 16S rDNA序列分析
• 1.5 研究意义、内容
• 1.5.1 研究意义
• 1.5.2 研究内容
• 第二章 海洋放线菌的分离
• 2.1 引言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 试剂
• 2.2.3 主要实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 培养基
• 2.3.2 样品的处理
• 2.3.3 放线菌的分离培养
• 2.3.4 放线菌的分离纯化及保藏
• 2.3.5 放线菌的初步鉴定
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 放线菌的分离结果
• 2.4.2 放线菌的初步鉴定结果
• 2.5 小结
• 第三章 放线菌发酵液抑菌活性的测定和生理生化特性
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.2.1 待测菌
• 3.2.2 抑菌活性测定用指示菌
• 3.2.3 主要试剂
• 3.2.4 主要仪器设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 培养基
• 3.3.2 种子液的制备
• 3.3.3 发酵液的制备
• 3.3.4 活性菌株筛选方法
• 3.3.5 生理生化特征
• 3.3.5.1 明胶液化
• 3.3.5.2 硝酸盐还原
• 3.3.5.3 淀粉水解
• 3.3.5.4 黑色素产生
• 2S产生'>3.3.5.5 H₂S产生
• 3.3.5.6 纤维素水解
• 3.3.5.7 碳源利用
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 抑菌结果
• 3.4.1.1 放线菌发酵液对大肠杆菌的抑菌结果
• 3.4.1.2 放线菌发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
• 3.4.1.3 放线菌发酵液对枯草芽孢杆菌的抑菌结果
• 3.4.1.4 放线菌发酵液对溶壁微球菌的抑菌结果
• 3.4.1.5 放线菌发酵液对副溶血弧菌的抑菌结果
• 3.4.1.6 具有抑菌活性菌株的放线菌
• 3.4.2 生理生化特性
• 3.4.2.1 明胶液化
• 3.4.2.2 硝酸盐还原
• 3.4.2.3 淀粉水解
• 3.4.2.4 黑色素产生
• 2S产生'>3.4.2.5 H₂S产生
• 3.4.2.6 纤维素水解
• 3.4.2.7 碳源利用
• 3.5 小结
• 第四章 发酵条件研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.1.1 菌种
• 4.2.1.2 主要实验仪器
• 4.2.1.3 主要试剂
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.2.1 培养基
• 4.2.2.2 碳源的利用
• 4.2.2.3 氮源的利用
• 4.2.2.4 初始pH的条件优化
• 4.2.2.5 种子菌龄的条件优化
• 4.2.2.6 接种量的条件优化
• 4.2.2.7 装样量的条件优化
• 4.2.2.8 正交试验
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 碳源的利用
• 4.3.2 氮源的利用
• 4.3.3 初始pH选择结果
• 4.3.4 种子液菌龄的选择结果
• 4.3.5 接种量的选择结果
• 4.3.6 发酵培养基装样量的选择
• 4.3.7 发酵工艺优化
• 4.4 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢