论文摘要
本文研究的杀虫抗生素产生菌GX-29是实验室自行分离得到的一株极暗黄链霉菌（Streptomyces fulvissimus）,其产物对卤虫和家蚕有很好的杀灭作用,并对稻瘟菌（Magnaporthe grisea）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、华丽曲霉（Aspergillus ornatus）、粘红酵母（Rhodotorula glulinis）等具有较强的抑制作用。本文以该菌株为诱变出发菌株,以枯草芽孢杆菌为初筛指示菌,以卤虫为复筛指示虫,对该菌株进行了诱变育种;利用卤虫活性追踪法,对其发酵培养基和发酵条件进行了优化;研究了活性物质的部分理化性质,并对其分离纯化路线进行了探讨。研究的结果如下:1.由出发菌株0#（杀虫的半致死时间为26.4 min）,依次进行紫外线诱变、60Co诱变、微波诱变,每步筛选出的高产菌株用于下一步诱变处理。紫外线诱变获得菌株101#（半致死时间22.6 min）,60Co诱变获得菌株202#（半致死时间21.3 min）,微波诱变获得菌株310#（半致死时间19.2 min）。三种诱变方法中,紫外线诱变的诱变贡献率最高,达到52.78%,其次微波诱变,60Co诱变最小,仅到18.06%。2.对310#菌株的摇瓶发酵培养基和培养条件进行了单因素和正交优化实验,得出最优培养基组合为:可溶性淀粉1.6%,葡萄糖0.3%,酵母粉0.4%,K2HPO4 0.1%,NaC1 0.1%,MgSO4·7H2O 0.1%,FeSO4 0.001%;最优发酵条件组合为:温度为28℃,发酵时间为4d,发酵培养基初始pH为7.4,摇床转速为150 r/min,接种量为8%,装液量为70mL/250mL,种龄为48h。在优化的条件下,310#发酵液的杀虫活性从原来的半致死时间为19.2min减少为13.9min,缩短了5.3min。3.对抗生素理化性质的研究发现,该物质是一种热稳定性较好（经高温灭菌处理仍保持较高的活性）,在pH6.0-10.0比较稳定,抗紫外线分解较好,分子量＜3000Da,极性较强的非脂溶性小分子物质。4.分离纯化路线的探讨:阳离子交换树脂的分离的条件:调节样品pH6.0-7.0,吸附流速为2.0mL/min;上样量按树脂/样品=15%进行;用0.2%的NaCl溶液洗脱,洗脱速度为0.5mL/min。凝胶过滤层析的条件:上样量为胶床体积的2%,蒸馏水洗脱,洗脱速度为0.25mL/min。5.经全波长扫描,确定抗生素的检测波长为290nm;经质谱分析,确定活性物质的分子量为1081。
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相关论文文献
- [1].抗生素产生菌GX-29的发酵研究[J]. 西南农业学报 2008(04)