赤子爱胜蚓纤维素酶的纯化及性质

论文摘要

纤维素是自然界含量最为丰富的可再生资源。在纤维素酶的催化作用下,纤维素可以降解为简单糖,进而可以发酵产生乙醇等清洁能源。蚯蚓在土壤中以植物为食,这与其体内的纤维素酶作用有关。研究蚯蚓纤维素酶的性质,在环保与土壤毒理学方面意义重大。从赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）中提取粗酶液,利用DNS法分析粗酶液中3类纤维素酶的活力。用刚果红染色法确定了赤子爱胜蚓含有3种内切型纤维素酶（Cx酶）,分别称作Cx酶Ⅰ、Cx酶Ⅱ和Cx酶Ⅲ。经DEAE-Cellulose-52离子交换层析分离Cx酶,0.20 mol/L NaCl洗脱峰中含有活性组分。将0.20 mol/L NaCl洗脱峰中的Cx酶用Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离,不能使三种Cx酶分开,说明它们的分子量接近。以制备电泳得到了3种Cx酶,用SDS-PAGE测得它们的分子质量分别为33 400 Da、28 800 Da和28 800 Da。用DNS法测得在粗酶液中内切型纤维素酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0。经薄层层析法分析酶解产物,证实粗酶液可将脱脂棉和CMC水解为纤维寡糖和葡萄糖,3种Cx酶均可将脱脂棉和CMC水解为纤维寡糖,表明Cx酶同时具有外切型纤维素酶（C1酶）活力。经制备电泳初步纯化得到了1种β-葡萄糖苷酶,测得其分子质量为60 330 Da。用纤维素类食物对蚯蚓进行诱导,发现蚯蚓的生长状况不佳,但其体内3类纤维素酶的酶活力明显增强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第1章 文献综述
• 1.1 纤维素简介
• 1.2 纤维素酶简介
• 1.2.1 纤维素酶概述
• 1.2.2 纤维素酶的作用机制
• 1.2.3 纤维素酶的来源
• 1.3 蚯蚓纤维素酶研究进展
• 第2章 蚯蚓粗酶液中纤维素酶活力的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.1.4 方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 粗酶液中的蛋白质浓度
• 2.2.2 葡萄糖标准曲线
• 2.2.3 粗酶液中纤维素酶各组分活力的分析
• 2.2.4 刚果红染色法鉴定内切型纤维素酶组分
• 2.3 小结
• 第3章 蚯蚓内切型纤维素酶组分的纯化及性质
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 仪器
• 3.1.4 方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 DEAE-Cellulose-52 离子交换层析
• 3.2.2 Sephadex G-100 凝胶过滤层析
• 3.2.3 制备电泳纯化得到3 种内切型纤维素酶
• 3.2.4 3 种内切型纤维素酶的分子质量
• 3.2.5 以刚果红染色法重新鉴定纯化得到的Cx 酶
• 3.3 小结
• 第4章 薄层层析分析蚯蚓纤维素酶酶解产物
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 仪器
• 4.1.4 方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 蚯蚓粗酶液酶解产物薄层层析结果
• 4.2.2 3 种内切型纤维素酶酶解产物薄层层析结果
• 4.2.3 蚯蚓β-葡萄糖苷酶的初步鉴定及纯化
• 4.2.4 β-葡萄糖苷酶的分子质量
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第5章 纤维素类食物诱导对蚯蚓纤维素酶活力的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 仪器
• 5.1.4 方法
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 饲养期间空白组与实验组蚯蚓的生长状况
• 5.2.2 空白组与实验组蛋白质浓度和纤维素酶活力的测定结果
• 5.3 小结
• 第6章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表论文情况