小菜蛾高致病力绿僵菌的筛选、鉴定及培养特性研究

论文摘要

小菜蛾是全球分布的大害虫,主要危害十字花科蔬菜。其危害重、繁殖快、容易对一般化学农药产生抗药性。因此开发开发蔬菜害虫小菜蛾的高致病力真菌生物农药有着重要意义。本研究建立了小菜蛾实验室种群,以2龄小菜蛾幼虫为供试虫源,测定了25株绿僵菌对小菜蛾的致病力,从中筛选出1株对小菜蛾幼虫有较高致病力的菌株CQM125。并对其做了小菜蛾侵染试验,目的在于评价该菌株对小菜蛾的控制作用以及其在生产中的应用潜能,取得了如下主要结果。组建了小菜蛾实验室种群,在25℃、RH 60%～80%、光周期14L:10D条件下,平均每只小菜蛾产卵约40粒,单只雌蛾产卵最高可达300粒。一龄和二龄幼虫的死亡率较高,平均世代周期约27天,具体卵2～3d,孵化率为97%;幼虫9～10d,存活率约20%;蛹3～4d,羽化率约95%;成虫8～16d。小菜蛾下代种群呈明显上升趋势,可为生物测定提供充足的虫源。以实验室保存或田间采集的共25株绿僵菌菌株对小菜蛾的致病力进行了评价,生测结果表明不同绿僵菌菌株对小菜蛾的致病力存在一定差异。CQM125、CQM124、CQM117、CQM108和CQM126 5个菌株对小菜蛾幼虫有较强的致病力,其累积死亡率分别为84.2%、78.9%、74.2%、66.9%、64.4%,显著高于其他菌株死亡率,显示出较高的致病力。其中毒力最高的菌株CQM125在20℃、1.0×108个孢子·mL-1孢子悬浮液接种处理小菜蛾幼虫LT50为3.97d;25℃、5. 0×107个孢子·mL-1孢子悬浮液接种的LT50为2.44d;25℃、8d的死亡率为84.2%。在25℃下,第7天的致死中浓度(LC50)为2.31×104个孢子·mL-1,对小菜蛾表现出良好的控制效果,具有一定的应用前景。经过形态特征和rDNA ITS序列比对分析,将绿僵菌CQM125鉴定为金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）。研究确定了适宜CQM125菌株营养生长和生殖生长的基础培养基和适合菌株CQM125产孢的最佳温度,光照,酸碱度及最佳碳、氮含量。优化后CQM125的产孢培养基为PPDA改良培养基,其中葡萄糖2%,蛋白胨0.5%;最适产孢温度30℃,最适产孢pH值为6.0。CQM125的产孢需要有光照刺激,最适合产孢的光照条件为前6天黑暗,后8天光照。研究结果表明,绿僵菌CQM125表现出对环境的良好适应性,并具有较强的耐碱性能。本文还研究了绿僵菌CQM125胞外蛋白酶和几丁质酶产生能力和受不同温度影响的规律。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 绪论
• 1.1 研究的目的和意义
• 1.2 杀虫绿僵菌的研究进展
• 1.2.1 绿僵菌的分类
• 1.2.2 绿僵菌的杀虫机理
• 1.3 小菜蛾生物防治的研究概况与进展
• 1.3.1 小菜蛾的人工饲养
• 1.3.2 小菜蛾的生物防治
• 1.4 研究目的和内容
• 1.4.1 研究目的
• 1.4.2 主要内容
• 1.4.3 技术路线
• 1.4.4 本研究的创新之处
• 2 小菜蛾室内人工饲养
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器与设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 甘蓝的种植
• 2.2.2 小菜蛾产卵诱集包（产卵包）的制备
• 2.2.3 小菜蛾卵的收集
• 2.2.4 卵的孵化及幼虫期管理
• 2.2.5 小菜蛾繁殖力的测定
• 2.2.6 小菜蛾羽化率和雌雄比的的测定
• 2.2.7 小菜蛾蛹重和蛹期的测定
• 2.2.8 小菜蛾成虫寿命的测定
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 小菜蛾产卵及产卵量
• 2.3.2 小菜蛾种群的羽化率和雌雄比
• 2.3.3 小菜蛾的蛹重和蛹期
• 2.3.4 小菜蛾成虫寿命
• 3 小菜蛾高致病力绿僵菌的筛选
• 3.1 供试材料
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 供试虫源
• 3.1.3 供试培养基
• 3.1.4 主要仪器设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 供试绿僵菌的分离纯化与保存
• 3.2.2 绿僵菌对小菜蛾幼虫及蛹的致病力测定
• 3.2.3 绿僵菌对小菜蛾幼虫的温室复测
• 3.2.4 绿僵菌CQM125 对小菜蛾幼虫的致病力复测
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 供试菌株对小菜蛾的致病力粗筛
• 3.3.2 高侵染力菌株的温室复筛
• 3.3.3 绿僵菌CQM125 对小菜蛾幼虫的致病力
• 4 小菜蛾高致病力绿僵菌菌株 CQM125 的鉴定
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 菌种来源
• 4.1.2 培养基
• 4.1.3 主要试剂
• 4.1.4 主要器材
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 绿僵菌CQM125 的形态观察
• 4.2.2 绿僵菌CQM125 的分子鉴定
• 4.3 试验结果与分析
• 4.3.1 绿僵菌CQM125 的菌落特征
• 4.3.2 绿僵菌CQM125 的形态特征
• 4.3.3 绿僵菌CQM125 的分子鉴定
• 4.3.4 菌株CQM125 的系统发育树分析
• 5 绿僵菌 CQM125 培养特性研究
• 5.1 试验材料
• 5.1.1 菌种
• 5.1.2 培养基
• 5.1.3 主要试剂
• 5.1.4 主要仪器设备
• 5.2 试验方法
• 5.2.1 绿僵菌CQM125 基础培养基的筛选
• 5.2.2 绿僵菌CQM125 培养特性研究
• 5.2.3 绿僵菌表皮降解酶
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 不同基础培养基对绿僵菌CQM125 生长及产孢的影响
• 5.3.2 培养温度对绿僵菌CQM125 生长及产孢的影响
• 5.3.3 酸碱度对绿僵菌CQM125 生长及产孢的影响
• 5.3.4 光照对绿僵菌CQM125 生长及产孢的影响
• 5.3.5 不同碳、氮含量对绿僵菌CQM125 生长及产孢的影响
• 5.3.6 绿僵菌CQM125 表皮降解酶的产生能力
• 6 结论与展望
• 6.1 主要结论
• 6.1.1 绿僵菌对小菜蛾的致病性
• 6.1.2 绿僵菌 CQM125 对小菜蛾幼虫的致病力
• 6.1.3 绿僵菌CQM125 菌株鉴定
• 6.1.4 绿僵菌CQM125 生物学特性
• 6.2 后续研究工作的展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录