论文摘要
目的血管新生在多发性骨髓瘤（mutiple myeloma, MM）的生长、侵袭和迁移中均起着关键作用,其机制目前仍未明了。本研究旨在研究人MM来源的微泡（Microvesicle, MV）对微环境中内皮细胞（Endothelial cells, ECs）血管新生的影响,并初步探讨其作用机制,有助于发现抗血管新生治疗新思路。方法采用MTT法、迁移实验（Transwell migration assay）、小管形成实验（Tube formation assay）、小鼠体内的matrigel plug实验等实验技术,研究人MM来源的MV对微环境中内皮EAHY926细胞血管新生的影响,并采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（Elisa）、激光共聚焦、流式细胞术等实验技术探讨MV影响血管新生的机制。结果体内外实验均证实人MM-MV促进EAHY926细胞的增殖、迁移和小管形成。激光共聚焦和流式结果确证MM-MV通过与EAHY926细胞融合而发挥作用。MM-MV与EAHY926细胞共培养不同时间后,12h、24h、36h和48h MV组较Control组EAHY926细胞增殖能力明显增强（P<0.05）。12h、24h和36h MV组与Control组相比EAHY926细胞迁移数目增多（P<0.05）;48h MV组与Control组相比迁移的细胞数差别不大（P>0.05）。体外实验9h和12h MV组较Control组小管形成数目明显增多,面积也增大（P<0.05）;3h和6h MV组与Control组相比小管形成数目差别不大,P>0.05。体内matrigel plug实验显示MV组matrigel plug颜色较Control组明显红润,病理切片行HE染色观察发现MV组较Control组新生血管的数量明显增多;计数每200倍视野下新生血管的数目。发现MV较Control组平均生成的血管数目多（P<0.05）。RT-PCR、Elisa结果均显示MV组EAHY926 IL-6、VEGF的表达、分泌量与Control组相比明显增加（P<0.05）。其中VEGF的分泌量在48h MV组与control组差别不大（P>0.05）。我们进一步探测MV促血管新生的机制,激光共聚焦和流式结果显示MM-MV可与EAHY926细胞直接融合,融合后CD138+的EAHY926细胞占3.1%;同时也能与MM细胞融合,说明MV与靶细胞的融合是具有普遍性,是其主要的作用方式。MM-MV与EAHY926细胞直接融合而促进EAHY926细胞表达分泌IL-6、VEGF,进而发挥促血管新生作用。结论人MM-MV促进肿瘤内皮细胞血管新生,是一种促MM血管新生新机制。
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