钩藤碱提取工艺和质量标准建立、初步药效学研究

论文摘要

钩藤为我国传统中药,其药材中所含吲哚类生物碱为主要药效成分,现代药理研究表明,钩藤生物碱除具有降压、抗癫痫作用外,还有一定抗焦虑作用,应用价值较高。为了进一步研究钩藤活性成分,特别是钩藤生物碱的药用价值,如何从钩藤药材中获得钩藤生物碱有效成分成为进一步研究的关键。现有提取工艺主要针对钩藤粗提物及总生物碱,针对有效成分的提取研究较少。本课题对钩藤碱提取纯化工艺、质量标准及抗焦虑药效学进行研究,确定最佳提取纯化工艺,考察质量标准,并对其抗焦虑药效进行初步评价。1.定性定量方法建立建立薄层色谱定性分析钩藤碱的方法,以丙酮-石油醚-氨水（1:2:0.2）为展开剂,钩藤碱在GF254硅胶板（规格:厚度0.20.25mm,25×40mm）上能与其它生物碱及杂质有效分离,在5分钟内即可完成钩藤碱的鉴别。建立高效液相色谱外标法定量分析钩藤碱的方法,采用Platisil ODS（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以乙腈:0.01mol/L磷酸二氢钾（KOH调pH8.0）为流动相,梯度洗脱,在40 min内乙腈与0.01mol/L磷酸二氢钾比例由30:70线性递增至60:40,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:245 nm,进样量:20μL。方法所获线性回归方程为y=3.64×104x-2.13×104,相关系数r=0.9995;重复性试验粗提物样品钩藤碱含量测定RSD为6.50%,保留时间RSD为0.69%（n=9）;加样回收试验高、中、低浓度回收率分别为95.95%、109.62%和114.40%。所建方法可将钩藤碱与其它生物碱及杂质有效分离,能满足对钩藤碱含量测定的要求。2.提取纯化工艺研究第一步先通过单影响因素试验对提取溶剂、药材冷浸时间及超声频率进行考察筛选,再通过L9（3）3正交试验对乙醇百分比、药材质量与溶剂体积比（物料比）及超声时间进一步考察,确定钩藤药材粗提物最佳提取工艺为以80%乙醇作为提取溶剂,药材质量与溶剂体积比（物料比）为1:5,4℃冷浸12 h,超声1 h,超声频率为50 Hz,药材粗提物提取率达到7.54%;第二步选择硅胶柱层析法作为从药材粗提物中分离制备钩藤碱的方法,以丙酮-石油醚-氨水（1:2:0.2）为洗脱溶剂,粗提物上样量与硅胶质量比为1:40,收集钩藤碱馏分以2%盐酸、氯仿萃取、水洗、冻干得到90%以上钩藤碱,提取率可达0.201‰。3.质量标准及初步稳定性研究采用紫外光谱、质谱及核磁共振对新工艺制备钩藤碱样品进行结构鉴定,并与标准谱图比较,确定了钩藤碱的结构、分子量;进行砷盐、重金属及残留溶剂检查,结果符合2010版药典标准;分别考察了高温、高湿、强光照射等影响因素对钩藤碱的影响,结果钩藤碱在10天内含量未发生明显变化;对钩藤碱在强酸、强碱条件下稳定性进行考察,结果在2%、4%、8% HCl中室温放置24 h,在0.1mol/L NaOH中放置8小时钩藤碱含量没有明显改变,说明钩藤碱在上述介质中较稳定。4.初步抗焦虑药效学研究进行大、小鼠高架十字迷宫、敞箱试验及小鼠明暗穿箱试验。以20%DMSO水溶液作为空白组、5 mg/kg地西泮为阳性对照组,考察不同剂量钩藤碱的抗焦虑药效。结果表明,80 mg/kg钩藤碱在小鼠高架十字迷宫、明暗穿箱及大鼠敞箱试验中表现出显著抗焦虑作用,其余剂量钩藤碱及钩藤总碱在个别模型中显示出不同程度抗焦虑作用。

论文目录

• 英文缩写一览表
• 英文摘要
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• 第1章 前言
• 第2章 钩藤碱定性定量方法建立
• 一 引言
• 二 仪器与材料
• 三 实验方法
• 四 结果与讨论
• 五 本章小结
• 第3章 钩藤药材粗提工艺研究
• 一 引言
• 二 仪器与材料
• 三 实验方法
• 四 结果与讨论
• 五 本章小结
• 第4章 钩藤碱分离纯化工艺建立及优化
• 一 引言
• 二 仪器与材料
• 三 实验方法
• 四 结果与讨论
• 五 本章小结
• 第5章 钩藤碱质量标准及初步稳定性研究
• 一 引言
• 二 仪器与材料
• 三 实验方法
• 四 结果与讨论
• 五 本章小结
• 第6章 钩藤碱抗焦虑药效学初步考察
• 一 引言
• 二 仪器与材料
• 三 实验方法
• 四 结果与讨论
• 五 本章小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 钩藤生物碱药理作用及提取分离研究现状
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文