Th2对旋毛虫感染小鼠Eos发挥ADCC效应的影响

论文摘要

旋毛虫病是由旋毛形线虫（Trichinella spiralis）简称旋毛虫,引起的一种人兽共患寄生虫病。宿主感染旋毛虫后,机体可以通过一系列的非特异性和特异性免疫反应控制感染,嗜酸性粒细胞（Eosinophil,Eos）在抗旋毛虫感染的过程中发挥了至关重要的作用。本实验旨在探讨Th2型免疫应答对Eos抗感染作用的影响。目的:探讨Th2应答在抗旋毛虫免疫的过程中如何调节Eos的功能,进一步了解嗜酸性粒细胞（Eos）在抗旋毛虫感染中的作用和地位,从而为阐明旋毛虫病的免疫学机制提供理论依据,为临床开发新的免疫疗法及疫苗提供理论依据和研究方向。方法:1.旋毛虫感染动物模型及Th2免疫抑制动物模型的建立。用灌胃法为BALB/c小鼠接种旋毛虫肌幼虫200条/只。腹腔注射D-sphingosine来抑制小鼠的Th2免疫。每日观察小鼠体重和饮食,记录其变化。2.相关免疫学指标测定。RT-PCR法测定小鼠脾脏IL-4、IL-5 mRNA含量。3.组织病理学观察。取小鼠腓肠肌制作石蜡切片,HE染色,光镜下观察肌肉组织内旋毛虫幼虫囊包形态及囊包周围炎症反应区面积。4.Eos体外杀伤旋毛虫肌幼虫实验。取小鼠全血,制备免疫血清,并用Ficoll密度梯度离心法分离、提纯感染旋毛虫的小鼠血液中的Eos。根据实验分组,在96孔培养板上加入各组小鼠的Eos、免疫血清、1640培养基及旋毛虫肌幼虫,采用体外培养法观察不同时期幼虫的死亡率。5.统计学分析。用SPSS 13.0统计软件对实验所得数据进行统计学分析。结果:1.小鼠体重饮食变化。接种旋毛虫后第9d之前,三组小鼠体重无明显差异,这段时间中,感染对照组和免疫抑制组小鼠饮食量开始减少,精神状况不佳,不喜活动,被毛凌乱,无光泽;第9d至第18d,体重上,正常对照组大于感染对照组和免疫抑制组,这段时间内感染对照组的饮食和症状开始有所改善,而免疫抑制组并无太大变化;18d后,正常对照组体重大于感染对照组大于免疫抑制组,这段时间中,感染对照组小鼠开始恢复饮食,精神状况与对照组已基本无异,症状基本消失,且免疫抑制组饮食症状也开始改善,但仍显精神不振,被毛凌乱。2.小鼠脾脏IL-4表达。与正常对照组相比,感染对照组小鼠IL-4的表达水平明显升高（p<0.001）;而免疫抑制组IL-4表达水平与正常对照组没有显著差异。旋毛虫感染可以诱导小鼠表达大量的IL-4,明显高于正常对照组,而注射D-sphingosine后,可有效的抑制IL-4在小鼠脾脏内表达,使IL-4表达量与未感染小鼠无异。3.小鼠脾脏IL-5的表达。与正常对照组相比,感染对照组和免疫抑制组小鼠IL-5的表达水平均明显升高（p<0.001）;且感染对照组小鼠IL-5的表达水平高于免疫抑制组。旋毛虫感染小鼠后,IL-5表达量增加,同正常对照组相比,明显升高。D-sphingosine对IL-5表达也有一定的抑制作用,但强度稍差,感染旋毛虫小鼠注射D-sphingosine后,IL-5表达虽然下调,但其表达量仍高于正常对照组。4.组织病理学变化。感染对照组和免疫抑制组小鼠腓肠肌切片中均可观察到大量的幼虫囊包,且在幼虫囊包和受累肌纤维周围存在明显的炎症反应区域,区域内炎症反应较为强烈,有大量炎细胞浸润,肌纤维变性、肿胀内部有大量胶原沉积。在100倍镜下测量炎症反应区宽度,结果显示,与感染对照组相比,免疫抑制组小鼠肌肉中幼虫囊包周围炎症区域宽度明显增加（p<0.001）,免疫抑制组肌肉内的炎症反应强度高于感染对照组。5. Eos体外杀伤旋毛虫肌幼虫。培养12h后,各组的幼虫平均死亡率均较低且各组间无显著差别;24h后,平均死亡率均有所上升,以Eos加正常血清组升高最为明显;48h后,平均死亡率明显升高,最为显著的是Eos加正常血清组。对48小时的各组幼虫平均死亡率进行卡方检验结果显示同正常空白组相比,Eos加免疫血清组死亡率明显提高（p<0.01）,且在相同情况下,感染对照组幼虫死亡率明显高于免疫抑制组（p<0.01）。结论:小鼠感染旋毛虫后,IL-4、IL-5表达水平明显上调,而D-sphingosine可以抑制Th2免疫,从而使这两种细胞因子的表达明显下调。免疫抑制的小鼠感染旋毛虫之后的症状更为严重,其外周血中的Eos体外杀伤旋毛虫肌幼虫的能力也有所下降,其原因是IL-4和IL-5含量的降低造成了Eos的成熟和激活发生障碍,且依赖Th2免疫的特异性IgE含量下降有关。因此Th2免疫有助于Eos发挥ADCC作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 Th2 对旋毛虫感染小鼠Eos 发挥ADCC 效应的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 参考文献
• 综述 嗜酸性粒细胞在寄生虫病免疫机理中作用的研究进展
• 个人简历