论文摘要
目的 建立2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型和神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并分别探讨其机制。方法 以分化的PC12细胞为神经元的细胞模型,将不同浓度的2,5-己二酮和NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,western blot检测p53蛋白表达、ERK1/2和NF-H磷酸化水平,比较各组间的差异。结果 随2,5-己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01),荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核,琼脂糖凝胶电泳有明显的DNA ladder,流式细胞仪检测凋亡率随2,5-己二酮浓度的增大而增加(P<0.05),western blot显示随2,5-HD浓度增加,p53蛋白表达增加,有明显的ERK1/2磷酸化;而随NGF浓度增加,细胞存活率升高(P<0.01),DNA断裂减少,细胞凋亡率降低(P<0.01),NF-H磷酸化水平增加,p53蛋白表达减少。结论 一定浓度的2,5-己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用;而小鼠2.5sNGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护2,5-HD诱导的PC12细胞损伤及凋亡。
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