次乌头碱对大鼠心肌GaM及Cx43表达的影响及甘草苷的干预作用

论文摘要

附子是中医临床常用的药,具有抗炎镇痛、抗肿瘤、调节免疫活性等活性,大毒,在临床上常与甘草等中药配伍使用以降低毒性,目前,对附子甘草的配伍大多停留在配伍后物质成分的分析以及电生理方面。研究发现Ca2+转运失调和细胞间电耦联障碍与心律失常密切相关,深入探讨次乌头碱与甘草苷配伍前后,钙调控蛋白CaM的表达和缝隙连接蛋白Cx43磷酸化状态的影响,从分子水平解释甘草苷对次乌头碱的减毒增效作用,对临床合理用药提供一定的实验依据。本论文以大鼠乳鼠原代心肌细胞和成年Wistar大鼠为实验材料,应用荧光定量PCR方法和蛋白印迹法,分别检测了不同剂量的次乌头碱、甘草苷及二者配伍对心肌细胞和心肌组织中CaM mRNA和蛋白表达的影响,以及对Cx43 mRNA表达和Cx43（Ser368）磷酸化水平的影响。体内研究发现,次乌头碱均能显著抑制CaM mRNA和蛋白的表达；甘草苷虽然抑制了CaM mRNA的表达,但却显著诱导了CaM的蛋白表达；次乌头碱与甘草苷合用后能显著抑制CaM mRNA和蛋白的表达。同时,各给药组对Cx43 mRNA的表达无显著影响,却显著抑制了Cx43（Ser368）的磷酸化；次乌头碱与甘草苷配伍后,显著抑制Cx43 （Ser368）的磷酸化,同时也拮抗了次乌头碱对Cx43 （Ser368）磷酸化的抑制作用。体外实验结果与体内结果基本一致。以上结果表明,次乌头碱能通过抑制CaM的表达和Cx43 （Ser368）磷酸化水平而影响心肌收缩功能及节律变化；甘草苷能通过与次乌头碱协同抑制CaM的表达,以及拮抗次乌头碱对Cx43 （Ser368）磷酸化的抑制作用,进而影响心肌细胞的节律变化。研究发现甘草苷在一定程度上拮抗了次乌头碱所致心律失常,这可能是甘草降低附子毒性的分子作用机制之一。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩略词
• 第一部分 绪论
• 1 附子及其有效成分的研究进展
• 1.1 附子现代药理学研究进展
• 1.2 附子配伍应用的研究进展
• 2+-CAM-CAMK Ⅱ信号通路'>2 心律失常与CA²⁺-CAM-CAMK Ⅱ信号通路
• 3 缝隙连接通道和连接蛋白CONNEXIN43
• 第二部分 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 仪器与设备
• 1.2 实验试剂
• 1.3 实验动物
• 2 实验方法
• 2.1 建立原代心肌细胞培养体系
• 2.2 心肌细胞搏动频率的测定
• 2.3 MTT法测定心肌细胞活力
• 2.4 检测原代培养心肌细胞的细胞膜LDH活性
• 2.5 成年大鼠灌胃给药后取心肌组织
• 2.6 心肌细胞和心肌组织CaM、Cx43 mRNA表达量测定
• 2.7 心肌细胞和心肌组织CaM蛋白表达量和Cx43 Ser368磷酸化水平测定
• 第三部分 结果与讨论
• 1 主要实验结果
• 1.1 次乌头碱对原代培养的心肌细胞搏动频率的影响
• 1.2 次乌头碱和甘草苷对体外培养心肌细胞活力的影响
• 1.3 次乌头碱和甘草苷对心肌细胞膜中LDH活性的影响
• 1.4 次乌头碱和甘草苷对心肌细胞与组织中CaM和Cx43 mRNA表达的影响
• 1.5 对心肌细胞和组织CaM蛋白表达影响
• 1.6 对心肌细胞和组织Cx43 Ser368磷酸化水平影响
• 2 讨论
• 2.1 药物浓度的选择
• 2.2 对钙离子调控的影响
• 2.3 对Cx43磷酸化状态的影响
• 2.4 总结
• 参考文献
• 附录
• 致谢