耐多药大肠埃希菌质粒介导的耐药基因探讨

论文摘要

目的 探讨泸州地区质粒介导的产ESBLs （extended -sperectrum P-lactmases）耐多药大肠埃希菌TEM,SHV,CTX-M,CTX-M-3,CTX- M-22、CTX- M- 24等6种耐药酶基因分布状况和对常见抗生素的耐药情况,为临床治疗大肠埃希菌感染合理选用抗菌药物提供理论依据。方法1.纸片扩散法（Kerby-Bauer法,K-B法）：采用美国全国临床检验标准委员会（the National Committee for clinical Laboratory Standards,NCCLS）推荐的该方法测定71株大肠埃希菌对常见的氨基糖苷类,氟喹诺酮类,第三代头孢菌素类抗生素的耐药性。该实验方法要点：将接种于M-H（酪蛋白琼脂）平板上（37℃孵育24小时）的待测细菌制备成与0.5麦氏标准管浊度相同的菌液,并把菌液均匀涂布于灭菌的Mueller-Hinton培养基表面,数分钟干燥后,用无菌镊将药敏纸片分别平贴于M-H培养基表面,每张纸片间距离不少于25mm,纸片中心距离平皿边缘不少于15mm。将贴有纸片的平皿于37℃孵育24小时后,用毫米尺测量抑菌环直径,抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限,抑菌环直径的大小反映了测试细菌对测定抗生素的敏感程度。大肠埃希菌菌标准菌株ATCC 25922进行质控对照。2.PCR技术：采用质粒小提试剂盒制备质粒DNA扩增模板；2xTaq PCR MasterMix,6种靶基因PCR扩增体系均为：每一个PCR反应体系共35ul,其中模板7ul,引物1对各5ul,2 xTaq PCR MasterMix l5ul,ddH2O 8ul。PCR反应循环参数为：94℃预变性3min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共30个循环；循环结束后72℃再延伸5min。PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳,以标准菌株ATCC 25922进行阴性对照。用紫外线检测仪分析结果并用凝胶成像仪摄像；3.PCR产物测序：PCR产物进行基因测序仪检测碱基序列,与已知的6种基因序列相比较。结果1.药敏实验结果：临床分离的71株大肠埃希菌中,全敏6株（8.57%）；单耐16株（22.86%）；双耐19株（27.14%）；耐多药30株（42.86%）。2.耐多药单酶基因检测结果：TEM有11株（36.67%）；SHV仅1株（3.33%）,所占比例较低；CTX-M有23株（76.67%）; CTX-M-3有21株（70%）, CTX-M-22有9株（12.86%）；CTX-M-24有24株（80%）。3.耐多药多酶基因检测结果：含2种酶基因同时检出的有30株(其中CTX-M+CTX-M-3有12株（40%）；CTX-M-24+CTX-M有12株（40%）；CTX-M-22+CTX-M-24有6株（20%）,含3种耐药酶基因共检出13株（32.5%）,含5种耐药酶基因有1株（3.33%）,未发现上述6种耐药性质粒酶基因3株（10.00%）。CTX-M类基因（包括CTX-M, CTX-M-3, CTX-M-22, CTX-M-24）和SHV,TEM类基因的检出具有统计学意义（P<0.001）。携带CTX-M-24,CTX-M-3,TEM,CTX-M,CTX-M-24 +CTX-M基因的菌株对AMK和TM的疗效具有统计学意义（P<0.05）；携带TEM,CTX-M,CTX-M-3基因的菌株对CFX和CPZ的疗效具有统计学意义（P<0.05）。结论泸州地区耐多药大肠埃希菌存在质粒介导的TEM、SHV、CTX-M、CTX-M-3、 CTX- M-22、CTX -M- 246种基因。单酶基因中以CTX- M、 CTX- M- 3、CTX- M- 24为主,SHV仅在1株中发现；复合酶基因中主要以下3种为主:CTX- M+CTX- M-3,CTX-M+CTX-M-24以及在同一质粒上出现3种不同的基因型。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 中英文缩略词对照表
• 致谢
• 大肠埃希菌质粒介导的耐药机制研究进展 综述
• 参考文献
• 己发表的论文复印件