论文摘要
食管癌相关基因2（Esophageal Cancer Related Gene 2,ECRG2）是利用mRNA差异显示技术比较来自3对高癌家族和正常食管组织筛选得到的一个差异表达基因,其开放阅读框长258bp,编码一个有85个氨基酸的蛋白质。它在正常组织中表达,肿瘤组织中表达下调,推测可能是新的候选抑癌基因,本课题研究ECRG2能否抑制肿瘤侵袭转移和增殖,以及可能的机制。本研究采用基因工程的技术,以pcDNA3.1（+）为表达载体,构建了pcDNA3.1（+）-ECRG2基因的真核表达质粒。然后在脂质体介导下转染到食管癌EC9706细胞和高转移肺腺癌PG细胞,经平板集落形成、软琼脂克隆形成等试验体外观察ECRG2对食管癌细胞生长恶性增殖的影响;通过划痕擦伤试验、transwell 游走试验和transwell 侵袭试验体外观察ECRG2对PG细胞侵袭转移能力的影响;G418筛选稳定转染ECRG2基因的PG细胞,经鼠尾静脉注射,观察肿瘤细胞在裸鼠体内侵袭转移能力的改变。通过Western Blot和明胶酶谱试验初步探讨上述变化的机制。对体外抑制增殖的研究发现,转染表达ECRG2蛋白后肿瘤细胞生长缓慢、细胞叠堆状或多层明显减少,集落形成能力明显降低,集落形成抑制率为67.5%;软琼脂克隆形成能力实验组（8±1.88）较对照组（14.3±3.13）明显降低（P<0.01）;进一步研究分析发现,ECRG2基因转染后P53、P21表达升高,ECRG2可能通过依赖P53的P21途径抑制肿瘤细胞的恶性增殖。对抑制瘤侵袭转移的研究发现,PG细胞转染表达ECRG2蛋白后体外侵袭转移能力下降,差异显著（P<0.05）。裸鼠体内实验组只有一只出现肺转移而对照组为四只,侵袭、迁移能力均下降。明胶酶谱和Western Blotting结果显示,基质金属蛋白酶2（MMP-2）分泌没有改变,但其活性降低,因此ECRG2蛋白可能是抑制了MMP-2的活化,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移。ECRG能够抑制肿瘤细胞的侵袭转移,有望成为治疗肿瘤的生物制剂.
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