肝大部切除术后小体积肝脏的保护性治疗及其机制的初步研究

肝大部切除术后小体积肝脏的保护性治疗及其机制的初步研究

论文摘要

第一章肝脏大部切除术小体积肝动物模型的建立目的:探讨建立肝大部切除术(major hepatectomy)小体积肝脏(small-for-sizeliver,SFSL)动物模型的可能性及其方法,为实验研究小肝综合征提供理想的动物模型。方法:采用20只SD大鼠行全肝切除术,用于计算肝脏各肝叶重量的百分比;对20只大鼠行90%肝大部切除术,进行手术方法和技巧的练习;另外20只大鼠采用Higgins-Anderson法行定型90%肝脏大部切除术,并对术后存活率进行观察。结果:SD大鼠肝脏右叶、中叶、左侧叶和尾状叶重量占全肝重量比分别为23%,36%,32%和9%,右下叶和右上叶重量占全肝重量比分别为7%和16%,右中叶和左中叶重量占全肝重量比分别为24%和12%,尾状前叶和尾状后叶重量占全肝重量比分别为5%和4%。手术成功率为95%(19/20)。1例死亡的原因为麻醉过深所致。10日生存率为30%(6/20)。结论:采用Higgins-Anderson法建立的肝大部切除术动物模型稳定可靠,可为小肝综合征的基础实验研究提供较为理想的研究手段和方法。第二章Terlipressin对肝大部切除术后早期门脉高灌注综合征保护性治疗的研究目的:探讨Terlipressin对肝大部切除术后再灌注早期门脉高灌注综合征的保护性治疗作用。方法:将36只大鼠随机分为两组,用于门脉高灌注损伤的血流动力学研究:特利加压素治疗组(Terlipressin group for hemodynamics,Th组)18只及生理盐水组,即对照组(control group for hemodynamics,Ch组)18只。两组大鼠均分别在给药前及再灌注后30分钟、1小时、2小时这4个时间点进行血流动力学观察,共分为6个亚组,分别为:Th1/2、Th1、Th2及Ch1/2、Ch1、Ch2,每亚组6只大鼠。余20只大鼠用于存活率研究,随机分为特利加压素治疗组(Terlipressin group for survival,Ts组)10只及对照组(control group for survival,Cs组)10只两组。采用肝大部切除术(90%)加肝门阻断(30分钟)动物模型,将Th组及Ts组大鼠在肝门阻断前通过阴茎背静脉注射Terlipressin,Ch组及Cs组采用相同的方法在相同的时间给予同等体积的无菌生理盐水。观察Terlipressin对小体积肝大鼠生存率及血流动力学的影响。结果:所有大鼠存活均超过24小时;Ts组10日存活率(80%)明显高于Cs组(30%),P<0.05。Th1/2亚组(13.21±0.32cmH2O)门脉压力明显低于Ch1/2亚组(16±1.03cmH2O),P<0.05;Th1亚组门脉压力降到最低,达11.52±0.17cmH2O,明显低于对照组Ch1亚组(13.5±0.18cmH2O),P<0.05;与相对应组基础门脉压力比较,Ch1/2亚组门脉压力显著性增加,P<0.05。Th1/2亚组门脉血流(7.21±0.21ml/min)与Ch1/2亚组(9.50±0.35ml/min)之间比较,Th1亚组(6.11±0.28ml/min)与Ch1亚组(6.99±0.19ml/min)之间比较均有显著性差异。同时,与相对应基础门脉血流量比较,Ch1/2亚组门脉压力显著性增加,P<0.05。Th组中的Th1/2(88.12±1.28mmHg)、Th1(80.83±1.79 mmHg)及Th2(76.29±0.89 mmHg)亚组平均动脉压与相对应的Ch1/2(57.97±2.01 mmHg)、Ch1(59.86±1.75 mmHg)及Ch2(63.71±1.37 mmHg)亚组比较明显增高,有显著性差异,其P值均小于0.05。同时,Th1/2、Th1及Th2亚组与相应的基础平均动脉压比较也有明显增高,有显著性差异,P值亦均小于0.05。两组各亚组之间及各组内每个亚组与基础中心静脉压比较没有显著性差异。结论:Terlipressin能显著提高肝大部切除术后小体积肝存活率。肝大部切除术术后小体积肝高灌注状态属再灌注后早期一过性改变,门脉高灌注多在再灌注1小时后自行缓解。Terlipressin能有效缓解门脉高灌注状态,达到降低门脉压力及血流量的治疗效果,进而减轻门脉高灌注损伤。第三章Terlipressin对肝大部切除术后早期小体积肝脏功能保护机制的初步研究目的:初步探讨Terlipressin对大鼠肝大部切除术后再灌注早期残余肝脏功能的保护作用及其保护的机制。方法:采用肝大部切除(90%)术后小体积肝大鼠动物模型,将60只大鼠随机分为两组:特利加压素治疗组(Terlipressin group,T组)30只及生理盐水组,即对照组(control group,C组)30只。两组大鼠均分别在再灌注后30分钟、2小时、4小时、6小时及24小时这5个时间点进行观察,共分为10个亚组,分别为:T1/2、T2、T4、T6、T24及C1/2、C2、C4、C6、C24。每亚组6只大鼠。对各亚组所有时间点不同的标本进行采集。血清标本进行丙氨酸氨基转移酶(ALT,alanine transaminase)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST,aspartate transaminase)及总胆红素测定。活体肝组织冰冻标本用于半定量RT-PCR法检测mRNA水平残肝内A20及iNOS基因表达水平。肝组织石蜡切片用于HE染色观察光镜下形态学改变、免疫组织化学法检测ET-1、A20及iNOS的细胞内表达分析以及TUNEL法原位检测凋亡细胞。结果:两组大鼠ALT、AST及Tbil在再灌注后24小时达到高峰,其中T6及T24亚组所有上述3个指标检测值明显低于相对应的C6和C24亚组,具有显著性差异,P值均小于0.05。A20除再灌注后半小时时间点外,余时间点T组各亚组较相对应C组各亚组表达明显上调,尤其T2亚组表达明显上调;iNOS在T组各亚组表达极弱。C2、C4、C6及C24均有表达:其中C2表达明显上调。光学显微镜下观察T组肝组织在再灌注后各个时间点形态学改变都较C组轻微。C24亚组肝组织见血管上皮细胞脱落、片状坏死、汇管区淋巴细胞侵润,而T24亚组肝小叶结构保持尚完整,肝细胞及汇管区形态学特征基本正常。C6亚组凋亡指数明显高于T6亚组,两组之间比较有显著性差异,P<0.05。免疫组织化学染色结果提示,再灌注后1/2小时T组各亚组A20表达即成强阳性;再灌注后2小时达到高峰;2小时、4小时、6小时三个时间点T组A20表达均强于C组相对应各亚组;24小时时间点两个亚组A20表达强度差别不明显。再灌注后1/2小时开始T组及C组相对应两亚组ET-1均有过度表达;T24亚组ET-1表达明显低于C24亚组。再灌注后1/2小时T1/2亚组iNOS即有过度表达,与C1/2亚组比较表达有下调;再灌注后24小时T24亚组iNOS表达较C24亚组明显下调。结论:Terlipressin不仅对于肝大部切除术后小体积残肝肝功能具有保护作用,可以预防肝功能进行性损害,改善预后,还具有改善残肝再灌注后早期炎性反应作用,这与iNOS的下调表达有关;Terlipressin可以减轻肝细胞凋亡,与A20基因表达上调有关;通过减轻肝窦机械性损伤,Terlipressin还有利于维持微循环稳定,与ET-1下调表达有关。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 专业名词缩写中英文对照简表
  • 前言
  • 第一章 肝脏大部切除术小体积肝动物模型的建立
  • 1 材料和方法
  • 1.1 材料
  • 1.2 方法
  • 2 结果
  • 2.1 SD大鼠肝脏的分叶及重量测量
  • 2.2 定型手术结果
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 第二章 Terlipressin对肝大部切除术后早期门脉高灌注综合征保护性治疗的研究
  • 1 材料和方法
  • 1.1 动物
  • 1.2 动物分组
  • 1.3 给药方案
  • 1.4 手术步骤和实验设计
  • 1.5 存活率研究
  • 1.6 血流动力学研究
  • 1.7 统计学处理
  • 2 结果
  • 2.1 存活率研究
  • 2.2 门静脉压力监测
  • 2.3 门静脉血流量测定
  • 2.4 平均动脉压监测
  • 2.5 中心静脉压监测
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 第三章 Terlipressin对肝大部切除术后早期小体积肝脏功能保护机制的初步研究
  • 1 材料和方法
  • 1.1 动物
  • 1.2 动物分组
  • 1.3 给药方案
  • 1.4 手术步骤及实验设计
  • 1.5 试剂与仪器
  • 1.6 生化检查
  • 1.7 半定量RT-PCR法检测mRNA水平残肝内基因表达
  • 1.8 形态学检查
  • 1.9 免疫组织化学法检测ET-1、A20及iNOS的细胞内表达
  • 1.10 TUNEL法检测凋亡细胞
  • 1.11 统计学分析
  • 2 结果
  • 2.1 肝脏生化指标
  • 2.2 A20和iNOS半定量RT-PCR结果
  • 2.3 形态学观察结果
  • 2.4 免疫组织化学染色结果
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 研究小结
  • 参考文献
  • 综述
  • 综述一
  • 参考文献
  • 综述二
  • 参考文献
  • 致谢
  • 在读博士期间发表的论文目录
  • 相关论文文献

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