（黑龙江省黑河市爱辉区农村疾病预防控制中心检验科黑龙江黑河164300）
【摘要】目的：探讨纸片法对于生活饮用水快速检测大肠菌群的有效性。方法：对98份水样分别用纸片法与多管发酵法进行总大肠菌群检测。结果：两种方法检测大肠菌群阳性率结果无显著性差异，两种检测方法大肠菌群MPN值符合率为96.93%。结论：两种方法的测定结果基本一致。但相对于多管发酵法，纸片法更加省时、省力，简便易行，适用于大批量样品快速检测。
【关键词】大肠菌群检测；纸片法；多管发酵法；结果
【中图分类号】R123.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）17-0295-01
水是生产生活中不可或缺的重要资源，水质的好坏直接影响着人们的生活质量和身体健康。近年来，环境及水资源污染问题日益严重，水的安全问题也引起了人们的广泛重视[1]。大肠菌群测定是检测生活饮用水情况的重要指标，具有广泛的卫生学意义。目前，我国环保部门检测水中大肠菌群常用传统的多管发酵法，但该方法准备工作量大，操作复杂，周期长，无法满足大批量样品快速检测的需求。1956年，Forg等提出的快速纸片在餐具消毒等的定性检测中得到了广泛应用，并被列入我国卫生部《生活饮用水检验规范(2001)》及国家环保总局《水和废水监测分析方法(第4版)》中的C类方法。本次研究中，通过对比分析快速纸片法与多管发酵法在生活饮用水中的大肠菌群的试验结果，探讨两种方法在生活饮用水大肠菌群检测中的应用，现报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
选择来自本地区农村生活饮用水，其中农户自备井水43份，农村学校自备水20份，农村饮水安全工程35份，本组水样共计98份。
1.2方法
1.2.1材料大肠菌群快速检测纸片(南京三爱宝业生产，国家卫生部食品卫生监督检验所监制)；纸片规格：大纸片为10cm×10cm，小纸片为5cm×5cm。乳糖蛋白胨、乳糖复发酵液、伊红美蓝培养基(EMB)和革兰氏染液均由杭州天和微生物试剂有限公司生产。以上培养基和试剂均在有效期内使用。
1.2.2多管发酵法按《生活饮用水卫生规范》进行，即取5支10ml双料乳糖蛋白胨培养基，每支接种水样10ml；然后取5支单料乳糖蛋白胨培养基每支接种水样1ml，再取5支单料乳糖蛋白胨培养基，每支接种10倍稀释(1ml水样加9ml灭菌生理盐水)水样1ml。发酵法于37℃培养24h观察结果。
1.2.3纸片法调节水样PH值至中性(7.0～8.0)每份监测水样按多管发酵法浓度梯度稀释，接种水样总量为55.5mL，分别接种大纸片五张，小纸片10张。每张大纸片接种10mL水样，5张小纸片每张接种1mL，另5张小纸片每张接种1:10稀释(用无菌生理盐水稀释)的水样1mL。接种水样均匀涂布于纸片上，用手轻轻压平，作好标记放入铺有湿纱布的搪瓷盘中，置于恒温箱内，于(37±1)℃培养18～24h，观察结果。
1.2.4结果判断[2]多管发酵法发酵乳糖产酸产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌者为阳性。纸片法若纸片保持紫蓝色不变为大肠菌群阴性，纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。根据每份水样纸片的阳性张数，查多管发酵法的总大肠菌群MPN检索表，查出相应的MPN值。
2.结果
对采用快速纸片法和多管发酵法进行检测，在98份水样中，采用快速纸片法检出阳性率26.53%(26/98)，发酵法检测阳性率23.47%(23/98)，快速纸片法稍于高发酵法，但两种方法对比，结果无显著性差异(P＞0.05)。98份水样中95份水样两种检测方法MPN值完全相同，其符合率为96.93%(95/98)。
3.讨论
大肠菌群是主要引起肠道疾病的病菌总称，其是监测食用水源以及餐具等生活用品是否受到粪便污染的主要标准。人体一旦食用了受到大肠菌群污染的饮用水对身体健康的危害极大。我国对食品卫生监测内容中，大肠菌群是主要检测的对象[3]。目前，生活饮用水可采用快速纸片法、多管发酵法等方法进行监测。多管发酵法是常用的大肠菌群检测方法，其不足在于操作程序比较复杂，营养基配制，消毒清洗工作量大，所占用的时间较长，不利于卫生监督工作效率的提高。为克服传统检测方法的不足，人们开始研究了各种检测方法。而大肠菌群快速纸片法克服了之前检测方法的不足，简化的操作流程，降低了检测的成本同时节省了时间。1956年，Forg采用快速纸片法检测餐具消毒等定性检测，快速纸片法检测受到广泛关注。快速纸片法检测大肠菌群的原理是通过将大肠菌群生长发育所需要的营养物质、指示剂及能够抑制革兰氏阳性细菌生长的抑制剂集中于纸片，在大肠菌群琥珀酸脱氢酶的作用下，使无色的氯化三苯基四氨唑受氢还原为无色化合物，再由一定温度下培养箱内培养，若有大肠菌群存在，即可根据分解乳糖产酸引起纸片PH值下降，使指示剂呈黄色，具有检测操作便捷、快速出结果等优势。
本研究结果显示，在98份水样中，采用快速纸片法检出阳性率26.53%(26/98)，发酵法检测阳性率23.47%(23/98)，快速纸片法稍于高发酵法，但两种方法对比，结果无显著性差异(P＞0.05)。98份水样中95份水样两种检测方法MPN值完全相同，其符合率为96.93%(95/98)。通过分析我们认为，纸片法只需一步，培养约18～24h即可出结果，与多管发酵法需进行多步骤培养、反复发酵，且需3～4d才可得出检测结果相比，具有更加检测过程快速、快速出结果、有效、敏感性高的优势，同时，纸片法是根据纸片颜色是否出现变化来判断结果的，实验人员无需专门的技术培训即可掌握。但是，研究也指出，纸片法在应用中阳性率检测情况仍有待于进一步研究、确认。
综上所述，在条件不具备的情况下，可经采用快速纸片法代替多管发酵法，且较为适用于小型供水工程、基层单位及个人自检，也适用于卫生监督检疫工作人员现场采样，快速检测之用，可大大减少工作量，具有一定的实用价值。
【参考文献】
[1]吴波.3M纸片法在水质检验工作中的应用[J].中国卫生产业，2015，16(1)：7-9.
[2]魏海明，张中伟.纸片法快速检测生活饮用水总大肠菌群的探讨[J].铁道劳动安全卫生与环保，2010，37(4)：209-211.
[3]王琳.生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较[J].临床合理用药，2015，8(3)：166.