论文摘要
1背景随着社会老年化问题的日趋突出,老年痴呆的发病率亦逐年上升。而AD是老年痴呆最常见的类型,已成为危害老年人健康和影响生活质量的主要疾病之一。AD的核心病变是神经元损害、认知损害和记忆障碍,与p-淀粉样物质沉积有关。研究认为Aβ沉积引起淀粉样血管变,导致神经元和血管损伤,形成老年斑,从而引起痴呆,而Aβ的损害和清除机制已经成为重要的研究领域。目前,对于AD发病过程中相关影响因素的认识尚未深入,以致治疗药物的研究未获得显著的疗效突破。中医学从“毒损脑络”而致络损神伤的病机理论出发的治疗取得了一定的疗效,但在药物研制上难以体现辨证论治理论的指导,尚未开发出临床有效的治疗药物。因此,探讨AD形成过程中的影响因素,寻找基础病变对AD发生发展的影响特征,具有重要的理论与应用价值。中药复方治疗AD有一定的疗效,但不对症药物治疗此病的研究机制还不是很深入2目的本实验从行为学变化、酶学改变、海马病理损害和Aβ的清除能力等多层次,探讨基础病变对Aβ（β-淀粉样肽）诱导AD小鼠模型成模的影响。从“痰热互结”“毒损脑络”病机出发,将基础病变和中医病机理论相结合,并以中药复方进行反证性药效观察,探讨不同病机比较性研究的方法,试图为深化中医药诊治老年痴呆的理论提供科学依据。3方法3.1选择高脂饲料喂养结合脂多糖注射模拟痰热互结基础病变,采用立体定向下双侧海马注射Aβ1-40建立AD小鼠模型,采用Morris水迷宫、小鼠跳台的方法观测小鼠学习记忆能力进行神经行为学评价。3.2 8周龄雄性C57小鼠,随机分成13个组：正常组、模型组、通络救脑口服液高中低剂量组、六味地黄颗粒组、阳性对照药安理申组。模型组和给药组又分为非复合模型（海马单纯注射Aβ）和复合模型（在痰热互结状态下海马注射Aβ的模型）。行为学采用Morris水迷宫、小鼠跳台的方法观测小鼠学习记忆能力。通过苏木素-伊红染色（HE染色）、免疫组化染色及Western blot等方法,观察海马组织结构的病理改变及Aβ含量,BACE、IDE的表达情况。4结果行为学Morris水迷宫检测显示,模型组逃避潜伏期显著长于正常组,通络救脑药物组、六味地黄药物组和安理申组逃避潜伏期比模型组缩短,差异有显著意义（P<0.05）跳台结果显示,模型组错误次数明显增多,小鼠学习记忆能力差,给药组记忆能力明显增强。神经病理组织学显示,模型组海马注射区可见神经元损害和脱失,胶质细胞增生,炎性反应明显。与非复合模型组比较,复合模型组海马病灶区神经元脱失更严重,小胶质细胞增生,炎性反应显著,血管周围出现β淀粉样蛋白沉着,毛细血管增生,血管壁增厚。各治疗组Aβ所造成的神经元损害较模型组显著减轻,通络救脑口服液可有效减少复合模型组血管周围淀粉样物质沉积、小胶质细胞增生和炎细胞浸润。而安理申和六味地黄颗粒在减轻小胶质细胞增生、炎性反应和复合模型组的血管周围淀粉样蛋白物质沉积上作用不显著。免疫组化显示Aβ生成酶BACE和降解酶IDE在拟AD小鼠模型中皮质、海马和齿状回均有阳性表达,IDE在微血管内皮细胞也有表达。并且通过Western Blotting半定量结果显示,Aβ注射后导致了模型组脑组织的Aβ和BACE含量上升,IDE含量下降,进而Aβ产生增多,降解能力下降,在“痰热互结”基础状态下IDE含量下降更为显著。通络救脑口服液治疗组Aβ、BACE的含量明显低于模型组,IDE明显高于模型组,提示该中药复方可在提高IDE脑内含量,促进Aβ降解方面有效；通络救脑口服液治疗组和六味地黄颗粒组IDE均高于安理申组,安理申属于胆碱酯酶抑制剂,作用并不在降解Aβ,说明通络救脑口服液和六味地黄颗粒在提高脑内IDE含量,促进Aβ降解方面有优势,这是通络救脑复方治疗AD的可能机制之一5结论小鼠高脂饲喂结合脂多糖注射造成的“痰热互结”状态,能够加剧AD海马注射拟AD模型小鼠学习记忆障碍,其海马和皮质神经元损害严重,血管周围Aβ沉积显著。通络救脑口服液和六味地黄颗粒对拟AD模型小鼠学习记忆障碍具有一定的改善作用,可降低BACE,减少Aβ沉积,促进IDE表达,加速Aβ降解,解毒通络方药具有独特的优势。