多西环素肠溶微丸的研制

论文摘要

多西环素（doxycycline）属半合成四环类抗生素,抗菌活性比四环素强2倍～4倍,目前在本类抗生素中毒性最小。具有广谱、高效的抗菌特点,临床应用广泛。在兽药应用方面,多西环素的药用剂型十分单一,兽医临床应用的主要有三种,即盐酸多西环素片、盐酸多西环素可溶性粉和多西环素注射液,其他剂型应用报道较少。由于多西环素水溶液不稳定,胃肠道副作用大。可溶性粉和片剂剂型适口性差,动物的依从性不良,难以保障动物的有效治疗剂量和均衡的治疗。肠溶微丸（enteric-coated pellets）想对于传统固体剂型而言具有突出优点,且其制备材料、制药设备和制备方法及工艺均较成熟。为此,本论文研究了多西环素肠溶微丸（doxycycline enteric-coated pellets）的制备,并对该制剂与多效灵（doxyprex（?））在猪体内的生物等效性进行了研究。本文根据药物的理化性质与光谱特征,建立了紫外分光光度法（UV）快速考察多西环素肠溶微丸中药物释放度的方法；建立了高效液相色谱法（HPLC）精密测定原料、制剂以及生物样品中多西环素含量的方法。经相关方法学确证其方法科学、结果可靠。采用UV法,建立双标准曲线,分别考察了制剂在在0.1mol·L-1盐酸（pH1）和pH6.8缓冲液（0.1mol·L-1盐酸溶液750ml中加入0.2 mol·L-1磷酸钠溶液250m1）两种溶媒中多西环素的释放度。结果显示：多西环素浓度C在1μg·ml-1～40μg·ml-1范围内时,在268nm处与吸收度A1的线性函数关系是：A1=0.0360C+0.0279 r=0.9998;在272nm处与吸收度A2的线性函数关系是：A2=0.0293C+0.0319 r=0.9997。制剂在酸性介质内2h药物的释放量平均为7.36%；在缓冲液介质中制剂15min药物平均释放量超过90%。结果表明,制剂符合《中华人民共和国药典·二部》2005版（附录XD）对肠溶制剂的要求。试验结果表明：多西环素肠溶微丸的配方和工艺设计既能满足肠溶制剂的要求,也能保障多西环素在小肠上段主动吸收的生理特性。为了进一步研究制剂在动物体内的代谢规律,并初步制订制剂的含量检测方法和质量控制标准,试验参考采用了《中华人民共和国药典·二部》2005版中关于多西环素含量测定的色谱条件对原料、制剂含量进行检测。采用Dikma C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,用氨试液调节pH值为8.0±0.2的0.05mol·L-1草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol·L-1磷酸氢二铵溶液（65：30：5）为流动相,建立的HPLC方法在280nm处分析测得本文研究用多西环素原料药的含量为97.32±0.75%,所制备的多西环素肠溶微丸制剂中多西环素的含量为标示含量的99.68±0.71%。试验结果显示回收率、精密度、稳定性RSD<5%。采用Dikma C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以磷酸调pH值至6.7的乙腈-甲醇-0.01mol·L-1草酸溶液（68：21：11）为流动相,建立的HPLC方法在350nm处检测猪血浆中药物含量,在此条件下,图谱峰形良好,无杂峰干扰测定。试验结果表明此色谱条件下,检测精密度良好,回收率良好。本文描述了以多功能挤出滚圆机器制备多西环素肠溶微丸。以淀粉糊精为稀释剂,羟丙基甲基纤维素水溶液为粘合剂制备微丸丸芯,在预试验考察的基础上以A稀释剂（糊精淀粉）、B粘合剂（HPMC水溶液）、C挤出速度、D滚圆速度、E滚转时间作为考察因素,以24目～30目间颗粒收率、堆密度、圆整度、脆碎度为考察指标,设计了5因素4水平正交试验研究制剂的配方和制备工艺。对考察指标采用特征值法赋予不同权重,通过方根法计算得到的特征矢量W=（0.750,0.036,0.107,0.107）,对应四个指标收率,再采用综合评分法得出“总分”指标。采用SPSS软件对各个指标进行方差分析,结果显示因素A、D对总分的大小有显著影响（P<0.05）,各因素对总分影响次序依次为A>D>C>E>B。因素B对脆碎度有显著影响（P<0.05）。最后筛选出微丸丸芯的处方及制备工艺：以7%糊精淀粉作稀释剂、3%HPMC水溶液作粘合剂、少量微粉硅胶作润滑剂、挤出速度为40 rpm,滚圆速度为850rpm,滚转时间为60秒。丸芯制备重现性试验显示优化方案下丸芯整体性质上具有良好的重现性。采用HPMCP 55s对丸芯包薄膜衣。通过对包衣工艺中各个因素的考察确定的包衣参数为：投料500g,6%HPMCP包衣液,转盘转速200rpm、鼓风量30 Hz、包衣温度40℃、喷雾压力20 kg·cm-2、供液速度9ml·min-1、增重20%,包衣完成后在40℃烘箱中干燥2小时。此条件下包衣微丸释放度合格,丸芯包衣重现性好。制得的微丸表面圆整光滑、颗粒均匀。稳定性试验结果表明多西环素肠溶微丸在常温、密封、避光的条件下可以有效贮存。有效期暂定两年。本文采用单剂量双交叉试验设计方案,对本研究制备的10%多西环素肠溶微丸和另一种进口10%多西环素预混剂多效灵（doxyprex（?））在6头断奶仔猪身上的生物等效性进行了研究。按多西环素10mg·kg-1体重单剂量混饲口服给药,于0h,5min、0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h耳缘静脉每次采血1.5ml,分离血浆并采用HPLC法检测血浆中药物的含量。试验结果经DAS软件拟合分析,SPSS软件统计分析,多西环素肠溶微丸的AUC0→=15.93±5.17μg·ml-1·h,AUC0→72=14.70±4.83μg·ml-1·h,Cmax=1.71±0.79μg·ml-1,Tmax=5±1.095h。参比制剂的AUC0→∞=15.59±5.47μg·ml-1·h,AUC0→72=14.79±5.38μg·ml-1·h, Cmax=1.82±0.51μg·ml-1,Tmax=4.33±1.366h。相对生物利用度F=107.08±47.40%。对参数Cmax、AUC0→72、AUC0→∞的对数作方差分析,再进行双单侧t检验,Tmax经非参数检验。结果显示受试制剂与参比制剂的主要药动学参数Cmax、AUC0→72、AUC0→∞、Tmax之间差异不显著,受试制剂与参比制剂生物等效。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 多西环素常见剂型及存在的主要问题
• 2 微丸成型技术及肠溶包衣技术概况
• 2.1 微丸概况
• 2.2 制备微丸的辅料
• 2.3 微丸的制备设备及方法
• 2.4 微丸的释药机理
• 2.5 包衣技术
• 3 常用多西环素制剂、含药血浆分析方法概况
• 4 立题依据
• 第二章 多西环素定量检测方法的建立
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 紫外分光光度法的建立
• 2.1 测定波长的选择
• 2.2 线性关系试验
• 2.3 稳定性试验
• 2.4 回收率试验
• 2.5 释放度测定
• 2.6 讨论
• 3 原料及制剂含量检测HPLC法的建立
• 3.1 色谱条件
• 3.2 对照品溶液及供试品溶液的配制
• 3.3 多西环素溶液标准曲线的建立
• 3.4 制剂含量测定及回收率、精密度、稳定性试验
• 3.5 讨论
• 4 血浆样药物含量检测HPLC法的建立
• 4.1 色谱条件
• 4.2 血浆样品预处理方法
• 4.3 定量限与检测限
• 4.4 血浆样标准曲线的绘制
• 4.5 回收率、精密度、稳定性试验
• 4.6 讨论
• 5 本章小结
• 第三章 多西环素肠溶微丸的处方和工艺研究
• 1. 材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 方法
• 2.1 包衣微丸的制备方法
• 2.2 微丸丸芯的成形机理
• 2.3 丸芯的评价指标
• 2.4 正交试验设计原理
• 3 预试验部分
• 3.1 稀释剂的选择
• 3.2 粘合剂的选择
• 3.3 含药量的选择
• 3.4 制备工艺水平的考察
• 4 多西环素肠溶微丸的制备
• 4.1 丸芯处方及制备工艺正交试验过程
• 4.2 正交试验结果及分析
• 4.3 优化方案下丸芯的重现性试验
• 4.4 多西环素微丸丸芯的包衣工艺
• 5 讨论
• 6 本章小结
• 第四章 多西环素肠溶微丸的稳定性研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 药品和试剂
• 2 制剂影响因素试验
• 2.1 测定方法与内容
• 2.2 高温试验
• 2.3 高湿试验
• 2.4 强光照射试验
• 3 加速试验
• 4 长期试验
• 5 讨论
• 6 本章小结
• 第五章 多西环素肠溶微丸生物等效性研究
• 1 材料和方法
• 1.1 药品及试剂
• 1.2 试验动物
• 1.3 仪器
• 2 血浆中样品的HPLC测定方法
• 2.1 色谱条件
• 2.2 血浆样品预处理方法
• 2.3 动物试验方案
• 2.4 方法学确证
• 3 试验结果
• 4 数据分析
• 5 讨论
• 6 本章小结
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文