产朊假丝酵母生物转化生成CDP-choline的研究

论文摘要

CDP-choline 是磷脂代谢的重要前体,广泛用于治疗各种脑血管疾病。本文选育了生物转化CDP-choline 的菌株产朊假丝酵母candida utilis,研究了发酵条件及发酵培养基,探索了其酶反应体系的优化条件。利用放线菌酮和TTC 作为一种筛选压力,应用紫外线及N+注入等方法对candida utilisYL 进行了诱变筛选。结果表明,突变株candida utilis YL-2-24 的CDP-choline 比出发菌株candida utilis YL 提高2.01 倍。对candida utilis YL-2-24 的发酵工艺进行了优化。通过培养基的单因子试验及正交试验,最终确定最佳发酵培养基配方为蔗糖4%、蛋白胨1.0%、NaNO32.0%、K2HPO40.5%、MgSO4·7H2O 0.5%、KH2PO4 0.1%;摇瓶发酵条件为初始pH5.5,接种量10%,装液量25ml/250ml , 温度32℃, 培养时间24h , 转速230 r/min , 生物转化生成18.63mg/gCDP-choline。candida utilis YL-2-24 细胞转化的酶促反应条件为CMP10mM、磷酸盐浓度300mM、磷酸胆碱50mM、葡糖糖1000mM、34℃、PH7.4、湿细胞的加量为600mg/ml、反应时间为10h,生物转化生成CDP-choline 的得率为28.63%,转化率达到84.4%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一篇 文献综述
• 1 CDP-choline 的生理功能和临床应用
• 1.1 CDP-choline 的生理功能
• 1.2 CDP-choline 的临床应用
• 2 CDP-choline 的合成
• 2.1 化学合成法
• 2.2 生物合成法
• 3 CDP-choline 的提取
• 4 国内生产现状与本课题的研究意义
• 参考文献
• 第二篇 研究部分
• 第一章 CDP-choline 检测方法的研究
• 1 材料、仪器与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要培养基
• 1.5 反应液
• 1.6 转化细胞培养与生物转化
• 1.7 分析方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 琼脂糖电泳法
• 2.2 薄层层析法
• 2.3 HPLC 法
• 本章小结
• 参考文献
• 第二章 CDP-choline 生物转化菌株的诱变育种
• 1 材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 培养基
• 1.5 反应液
• 1.6 实验方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 生物转化CDP-choline 菌种的筛选
• 2.2 candida utilis YL 菌株的诱变育种
• 本章小结
• 参考文献
• 第三章 CDP-choline 生物转化的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要培养基
• 1.5 反应液
• 1.6 实验方法
• 2 结果与讨论
• 2.1 培养基对菌体生长和生物转化的影响
• 2.2 培养条件对菌体生长和生物转化的影响
• 2.3 生物转化合成CDP-choline 反应体系的优化
• 本章小结
• 参考文献
• 附录
• 致谢