黄芪载入肝素修饰胶原促血管再生的实验研究

论文摘要

背景 组织工程被认为是利用有活力的人造组织来修复机体的缺损。理想的组织工程材料应当是无毒性、组织相容性佳、可生物降解及促机体内血管再生。而血管再生至今仍然是组织工程中具有挑战性的研究领域。胶原作为动物界分布最广的细胞外物质，具有高度的组织相容性，体内无毒且可生物降解。肝素作为疗效确切的抗凝药物，也具有调节血管再生作用，此外，许多促血管再生的生长因子(rhVEGF165、bFGF等)与肝素具有亲和力。据此，应用交链剂EDC／NHS将肝素共价结合至胶原内，然后再以促血管再生生长因子rhVEGF与之生理性结合。另外，益气活血类中药也具有促血管再生疗效，且价格经济、易于保存、消毒，故将中药黄芪植入修饰后胶原内，通过鸡胚尿囊膜模型探查其促血管再生疗效。 方法 试验用胶原由Dr．Snwelack Skin & Health Care AG公司友情提供，被制成5×5×5mm（3.8～4.2mg）或直径为10mm，厚度为2mm的圆片（3.8～4.2mg）大小。肝素通过交链剂EDC／NHS共价结合至胶原内。首先肝素

论文目录

• 中英文缩略语
• 论文摘要（中文）
• 论文摘要（英文）
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1.材料
• 2.1.1 胶原
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 实验用生长因子、鸡胚
• 2.2 方法
• 2.2.1 胶原修饰过程
• 2.2.2 共价结合入胶原内肝素量的测定
• 2.2.3 体外降解试验
• 2.2.4 自由氨基团的测定
• 2.2.5 修饰后胶原的亲水性测定
• 2.2.6 rhVEGF、中药黄芪植入胶原
• 2.2.7 鸡胚尿囊膜实验
• 2.2.8 VEGF体外释放试验（ELISA法）
• 2.2.9 VEGF、肝素体外释放实验（放射同位素标记法）
• 2.2.10 血红蛋白测定
• 2.2.11 标本干重测量
• 2.2.12 免疫组化标记
• 2.3 统计方法
• 3 结果
• 3.1 未修饰及肝素修饰后的胶原电子显微镜照片
• 3.2 肝素共价结合至胶原内
• 3.2.1 标准曲线的结果
• 3.2.2 反应步骤最佳条件的选定
• 3.2.3 通过EDC／NHS与肝素的不同例来提高肝素结合率
• 3.2.4 通过不同的肝素与交链剂EDC／NHS比值来调节肝素结合
• 3.3 修饰后胶原的体外降解结果
• 3.4 修饰后胶原内自由氨基团的测定
• 3.5 修饰后胶原的亲水性
• 3.6 肝素共价结合至胶原的量与胶原体外降解率的相关关系
• 3.7 VEGF及肝素的体外释放试验结果
• 3.8 VEGF及黄芪载入（修饰后）胶原促微血管生成结果
• 3.8.1 胶原植入鸡胚尿囊膜孵化7夭血管生长情况的大体照片
• 3.8.2 VEGF及黄芪载入（修饰后）胶原促微血管生成大体标本观察表
• 3.8.3 胶原植入鸡胚尿囊膜孵化7天微血管生长情况照片
• 3.8.4 鸡胚尿囊膜植入标本后一周取出的大体照片
• 3.8.5 （修饰后）胶原促微血管生成结果
• 3.8.6 黄芪、VEGF载入（未）修饰后的胶原促微血管再生计数
• 3.8.7 黄芪、VEGF载入（未）修饰后的胶原血红蛋白含量
• 3.8.8 黄芪、VEGF载入（未）修饰后的胶原干重
• 3.8.9 黄芪、VEGF载入（未）修饰后的血管再生病理免疫组化切片
• 4 讨论
• 4.1 胶原修饰反应的机理
• 4.2 肝素结合至胶原内
• 4.2.1 肝素结合的最佳条件
• 4.2.2 关于测定肝素结合量的方法
• 4.2.3 肝素结合入胶原的量由交链剂EDC／NHS与肝素比值决定
• 4.3 修饰后胶原的体外降解率
• 4.4 修饰后胶原的亲水性
• 4.5 修饰后的胶原生理性结合VEGF后VEGF及肝素的体外释放率
• 4.6 修饰后的胶原的促血管再生的评价
• 4.7 展望
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述及参考文献
• 论文独创性声明
• 论文使用授权声明