论文摘要
绵羊主要组织相容性复合体（Major histocompitibility complex,MHC）又称为绵羊淋巴细胞表面抗原（Ovine Lymphocyte Antigen,OLA）,是由紧密连锁、高度多态的基因位点组成染色体上的一个遗传区域,其中MHC-Ⅱ类分子的DRB和DQB 2个基因所编码的MHC抗原在其免疫系统中发挥重要的作用,MHC与许多动物疾病的抗性、易感性、免疫应答以及生产性能都有密切关系。本试验对MHC-DRB1、DQB1基因在中国美利奴（新疆军垦型）羊（简称中国美利奴羊）和多浪羊群体中的分布进行检测,并且结合两绵羊品种的包虫病感染情况,探讨MHC-DRB1、DQB1基因PCR-RFLP多态性与包虫病遗传抗性间的相关性。为进一步研究MHC对包虫病的抗病免疫机制,以及抗病育种研究提供重要的依据,具有重要的学术理论价值和现实生产意义。1、本试验用ELISA试剂盒对塔城、伊犁和石河子部分地区的中国美利奴羊（868只）及喀什地区多浪羊（351只）包虫病感染情况进行了血清学诊断。结果,塔城、伊犁和石河子地区中国美利奴羊的平均感染率分别为22.33%、48.8%和6.9%,相互之间有显著差异（P﹤0.01）。相同饲养模式下,多浪羊和中国美利奴羊的包虫病感染率分别为26.84%和58.1%,差异极显著（P﹤0.01）。2、利用PCR-RFLP方法,对中国美利奴羊和多浪羊MHC-DRB1、DQB1基因第2外显子进行了遗传多态性检测,结果显示,中国美利奴羊和多浪羊的MHC-DRB1基因第2外显子在SacII、MvaI、SacI、Hin1I和HaeIII 5个酶切位点存在丰富的多态性。两绵羊品种均检测出了2、3、2、2和6种等位基因,但基因型分别为3、5、3、3、15和3、3、3、3、18种,MHC-DRB1第2外显子的229、225、208、210、178、173、159、87位碱基上存在多态性。而MHC-DQB1基因在MroxI、ScaI、SacII、NciI、TaqI、MvaI和HaeⅢ7个内切酶中,中国美利奴羊分别检测到2、2、4、2、3、6和3种等位基因和3、3、7、3、4、16和6种基因型,多浪羊在MroxⅠ、ScaⅠ、Sac II、TaqⅠ、MvaⅠ和HaeⅢ6个内切酶中检测到2、2、3、2、6、3种等位基因和3、3、5、2、14、5种基因型,MHC-DQB1第2外显子的266,246,231,217,213,198,192,174,161,140,96,34位碱基上存在多态性。中国美利奴羊和多浪羊MHC-DRB1、DQB1基因第2外显子在以上酶切位点均存在丰富多态性,其中,经克隆测序证实中国美利奴羊MHC-DQB1基因HaeⅢm、HaeⅢn、MvaⅠz和MvaⅠy是新等位基因。3、对中国美利奴羊和多浪羊包虫病阴性和阳性羊的MHC-DRB1和MHC-DQB1等位基因频率和基因型频率分别进行统计分析和差异性检验,结果显示,中国美利奴羊MHC-DRB1的MvaⅠb、HaeⅢe等位基因与包虫病抗性有相关（P﹤0.01）,MvaⅠC（P﹤0.01）、HaeⅢd（P﹤0.05）与包虫病易感性相关。MvaⅠbb（P﹤0.01）、HaeIII ee和SacⅠab基因型（P﹤0.05）可能是包虫病的抗性基因型,而MvaⅠbc、HaeIII bd（P﹤0.01）、SacIIab和HaeIII df（P﹤0.05）可能是包虫病的易感基因型。MHC-DQB1基因的MvaⅠD（P﹤0.05）、SacIIb、TaqⅠA、HaeⅢN（P﹤0.01）为包虫病抗性相关等位基因,TaqⅠB、MvaⅠC、HaeⅢM（P﹤0.01）为易感性相关等位基因。MvaⅠDZ（P﹤0.05）、TaqⅠAA和HaeIII NN（P﹤0.01）为包虫病抗性相关基因型,而MvaⅠCZ（P﹤0.05）、TaqⅠAB和HaeIII MN（P﹤0.01）为包虫病易感性相关基因型。多浪羊MHC-DRB1的HaeⅢa（P﹤0.05）可能是包虫病的易感性等位基因,SacⅠab、HaeⅢcf、Hin1Ⅰaa（P﹤0.05）基因型对包虫病具有一定的抗性, HaeIII be和HaeIII ef（P﹤0.01）、SacⅠbb、HaeIII aa和Hin1Ⅰab（P﹤0.05）提示为包虫病的易感性基因型。MHC-DQB1的MvaⅠD（P﹤0.01）与包虫病抗性相关。MvaⅠDD和MvaⅠCD基因型（P﹤0.05）可能是包虫病的抗性基因型,而MvaⅠBZ（P﹤0.05）疑似为易感基因型。4、中国美利奴羊和多浪羊MHC基因座不同单倍型与包虫病抗性或易感性相关分析结果表明,中国美利奴羊MHC基因座单倍型DRB1-SacIAB、DRB1-MvaIbb、DQB1-TaqIAA、DQB1-HaeⅢNN与包虫病抗性密切关联（P﹤0.01）,而单倍型DRB1-MvaIbc、DQB1-MvaIYY、DQB1-TaqIAB、DQB1-HaeⅢMN和单倍型DRB1-MvaIbb、DQB1-MvaICC、DQB1-TaqIAB、DQB1-HaeⅢMN与包虫病易感性相关（P﹤0.01）。多浪羊MHC基因座单倍型DRB1-SacIAB、DRB1-HaeⅢff、DQB1-MvaICD和单倍型DRB1-SacIAB、DRB1-HaeⅢff、DQB1-MvaIDD与包虫病抗性相关（P﹤0.05）,然而,单倍型DRB1- Hin1Ⅰab、DRB1-HaeⅢbe和单倍型DRB1- Hin1Ⅰab、DRB1-HaeⅢef以及单倍型DRB1- Hin1Ⅰab、DRB1-HaeⅢaa分析认为与包虫病的易感性相关（P﹤0.01）。5、经对中国美利奴羊MHC基因单倍型DRB1-SacIAB、DRB1-MvaIbb、DQB1-TaqIAA、DQB1-HaeⅢNN个体人工感染攻虫试验,进一步验证了该单倍型为包虫病抗性相关基因单倍型。6、基因位点处于Hardy-Weinberg平衡对于群体遗传结构的稳定起着重要的作用。MHC-DRB1基因各酶切位点的Hardy-Weinberg平衡状态在两绵羊品种间不一致,中国美利奴羊在SacI和Hin1Ⅰ位点上达到Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）,多浪羊在MvaⅠ位点达到Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）,其余酶切位点均处于非平衡状态。而在MHC-DQB1基因各酶切位点,中国美利奴羊在TaqⅠ、MroxⅠ位点,多浪羊在TaqⅠ位点达到Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）,其余酶切位点都处于Hardy-Weinberg非平衡状态（P﹤0.01）。