菟丝子黄酮和蛇床子香豆素对小鼠性腺和肾脏雄激素受体基因表达的影响

论文摘要

黄酮类化合物在自然界的存在非常广泛，大多数的植物中都存在有黄酮类化合物，而且许多研究表明黄酮类化合物具有多种生物活性。研究表明黄酮类化合物属于植物激素类物质，具有激素样作用。菟丝子是传统的补肾壮阳中药，在中国用于治疗多种激素缺乏引起的疾病。菟丝子具有滋补肝肾，固精缩尿，安胎，明目，止泻等作用。可用于阳痿遗精，尿有余沥，以及尿频，腰膝酸软，目昏耳鸣，肾虚胎漏，胎动不安，脾肾虚泻，外治白癜风。香豆素类化合物是一类具有芳甜香气的天然产物，是药用植物的活性成分之一。香豆素类化合物具有重要的生物活性，研究表明香豆素类化合物具有激素样作用。蛇床子亦为传统的补肾壮阳中药，在中国的使用的历史非常悠久。《中国药典》记载蛇床子具有温肾壮阳，燥湿，祛风，杀虫的作用。可用于阳痿，宫冷，寒湿带下，湿痹腰痛，外治外阴湿疹，妇人阴痒，滴虫性阴道炎。本实验研究菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对肾阳虚模型的治疗恢复作用。采用乙醇回流提取和聚酰胺柱层析获得菟丝子总黄酮；采用乙醇回流提取和大孔吸附树脂柱层析获得蛇床子总香豆素。将小鼠随机分为八个组，分别为正常对照组，模型对照组，甲基睾酮阳性对照组，金匮肾气丸阳性对照组，菟丝子大剂量给药组，菟丝子小剂给药量，蛇床子大剂量给药组，蛇床子小剂量给药组（每组10只）；除正常组外，其余各组腹腔注射氢化可的松制造肾阳虚模型；造模成功以后，分别给菟丝子大、小剂量组以等体积不同浓度的菟丝子总黄酮溶液灌胃，蛇床子大、小剂量组用等体积不同浓度的蛇床子总香豆素溶液灌胃，甲基睾酮组给以等体积的甲基睾酮，金匮肾气丸组给以等体积金匮肾气丸溶液，正常组和模型组给以等体积的生理盐水，灌胃14天后，摘除眼球取血，离心收集血清，并取其肾脏、性腺，免疫组织化学材料用固定液固定，其余材料液氮速冻备用。分别采用放射免疫法测定血清中睾酮含量，采用实时定量RT-PCR检测转录水平mRNA的表达，采用免疫组织化学法检测组织中蛋白质的分布与表达量。实验结果：（1）菟丝子总黄酮的得率为2.6％，其中黄酮类化合物含量为57.3％；（2）蛇床子香豆素的得率为4.3％，采用HPLC测得其中蛇床子素的含量为19.9％；（3）菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素能够恢复氢化可的松引起的小鼠体重下降，改善小鼠的肾阳虚状态；（4）菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素能够使肾阳虚小鼠降低的血清睾酮含量得到恢复，使其接近正常组；（5）菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素能够改善氢化可的松引起mRNA的表达量下降，使给药组的mRNA表达量接近正常组；（6）菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对蛋白质表达量的影响具有一致趋势，即菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素能够恢复肾阳虚引起的蛋白质表达量的降低。结论：通过测定小鼠体重的变化，血清中睾酮的含量变化，雄激素受体基因转录水平mRNA的表达量，以及翻译水平蛋白质的表达量来阐述两种药物影响雄激素受体基因表达的分子机制。表明菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素具有补肾壮阳的作用，其作用的机制是提高睾酮的含量和雄激素受体基因表达的水平。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 菟丝子的化学成分和药理作用
• 1.1.1 菟丝子的化学成分
• 1.1.2 菟丝子的药理作用
• 1.2 黄酮类化合物
• 1.2.1 黄酮类化合物的结构类型和分类
• 1.2.2 黄酮类化合物的理化性质
• 1.2.3 黄酮类化合物在植物中的分布
• 1.2.4 黄酮类化合物的提取分离
• 1.2.5 黄酮类化合物的生物活性
• 1.2.5.1 对心血管系统的作用
• 1.2.5.2 保肝解毒作用
• 1.2.5.3 抗炎作用
• 1.2.5.4 雌激素样作用
• 1.2.5.5 抗菌、抗病毒作用
• 1.2.5.6 清除人体自由基的作用
• 1.2.5.7 对内分泌的调节作用
• 1.2.5.8 其它作用
• 1.3 蛇床子的化学成分和药理作用
• 1.3.1 蛇床子的化学成分
• 1.3.2 蛇床子的药理作用
• 1.4 香豆素类化合物
• 1.4.1 香豆素类化合物的结构类型
• 1.4.2 香豆素类化合物的理化性质
• 1.4.3 香豆素类化合物在植物中的分布
• 1.4.4 香豆素类化合物的提取和分离
• 1.4.5 香豆素类化合物的波谱学特征
• 1.4.6 香豆素类化合物的生物活性
• 1.4.6.1 抗菌、抗病毒作用
• 1.4.6.2 抗肿瘤作用
• 1.4.6.3 抗HIV作用
• 1.4.6.4 平滑肌松弛作用
• 1.4.6.5 抗血凝作用
• 1.4.6.6 肝毒性
• 1.4.6.7 i-NOS抑制活性
• 1.4.6.8 激素样活性
• 1.4.6.9 其他作用
• 1.5 肾阳虚模型
• 1.5.1 肾阳虚证的检测指标
• 1.5.2 诊断指标选择依据的论证
• 1.5.3 肾阳虚的造模
• 1.5.4 肾阳虚证的特点
• 1.5.5 肾阳虚证的理论基础
• 1.6 雄激素与雄激素受体（AR）
• 1.6.1 雄激素的种类与来源
• 1.6.2 雄激素的作用
• 1.6.3 雄激素受体
• 1.7 选题依据
• 2 实验研究
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 菟丝子总黄酮的提取和有关成分含量的测定
• 2.2.2 蛇床子香豆素的提取和有关成分的含量测定
• 2.2.3 动物分组
• 2.2.4 小鼠体重的比较
• 2.2.5 激素含量的测定
• 2.2.6 免疫组织化学
• 2.2.6.1 制片前玻片处理
• 2.2.6.2 石蜡切片的制作
• 2.2.6.3 雄激素受体免疫组织化学染色
• 2.2.7 总RNA的提取及实时定量PCR
• 2.2.7.1 总RNA的提取
• 2.2.7.2 逆转录
• 2.2.7.3 实时荧光定量PCR
• 2.2.8 数据分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 菟丝子总黄酮的提取
• 2.3.2 菟丝子中总黄酮含量的测定
• 2.3.2.1 标准品溶液的制备
• 2.3.2.3 样品供试液的制备
• 2.3.2.4 样品供试液中总黄酮含量的测定
• 2.3.3 菟丝子中槲皮素含量的测定
• 2.3.3.1 仪器与试剂
• 2.3.3.2 色谱条件
• 2.3.3.3 标准品溶液的制备
• 2.3.3.4 标准曲线的制作
• 2.3.3.5 样品含量的测定
• 2.3.4 蛇床子香豆素的提取
• 2.3.5 蛇床子中有效成分含量测定
• 2.3.5.1 仪器与试剂
• 2.3.5.2 色谱条件
• 2.3.5.3 标准品溶液的制备
• 2.3.5.4 标准曲线的制作
• 2.3.5.5 样品含量的测定
• 2.3.6 小鼠体重
• 2.3.7 睾酮含量测定
• 2.3.8 小鼠肾脏、性腺中AR基因免疫组化灰度值的比较
• 2.3.9 小鼠性腺、肾脏中ARmRNA的实时定量RT-PCR定量分析
• 2.4 讨论
• 2.4.1 菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对小鼠体重的影响
• 2.4.2 菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对血清中睾酮含量的影响
• 2.4.3 菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对mRNA表达量的影响
• 2.4.4 菟丝子总黄酮和蛇床子总香豆素对蛋白质表达量的影响
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 缩略词表
• 主要仪器设备
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果