JAK2V617F基因突变与骨髓增殖性疾病关系的临床研究

论文摘要

目的：探讨分析JAK2V617F突变与骨髓增殖性疾病（MPD）的关系。方法：1、对236例MPD或其他恶性血液病患者进行回顾性诊断,并按疾病进行分类。2、常规方法抽提所有患者的基因组DNA。3、用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）检测所有患者JAK2基因V617F突变,并对部分病人的PCR产物进行测序。4、分析各种疾病JAK2V617F突变的阳性率,比较JAK2V617F阳性与阴性患者的临床及实验室特征的关系。结果：（1）236例患者包括BCR-ABL（-）的MPD患者157例,其中PV44例,ET 63例,PMF 48例,CNL 1例,CEL 1例；BCR-ABL（+）的CML26例；MDS 26例；CMML5例；AML 13例；ALL 2例；CLL 2例；淋巴瘤5例。（2）应用AS-PCR法共检出JAK2V617F阳性患者共110例。其中BCR-ABL（-）的MPD患者JAK2V617F（+）107例,总体阳性率68.1%,包括PV患者40例（阳性率91%）,ET患者39例（阳性率62%）,PMF 27例（阳性率56%）以及1例CNL患者。还分别在MDS、CMML及AML患者中各检出1例JAK2V617F（+）患者。26例BCR-ABL（+）的CML患者中无一例检测出JAK2V617F突变。9例淋系肿瘤（ALL、CLL及淋巴瘤）患者亦未检测出JAK2V617F突变。（3） BCR-ABL（-）的MPD患者JAK2V617F基因突变阳性率（68.1%）明显高于CML及其他疾病患者（P<0.05）。在MPD患者中PV组、ET组、PMF组的JAK2V617F基因突变阳性率有统计学差异（P=0.01）。进一步进行组间两两比较,PV组的JAK2V617F突变阳性率高于ET组和PMF组（P=0.01；P<0.05）。ET组和IMF组比较,JAK2V617F基因突变率无显著差异（P=0.548）。44例PV患者中40例JAK2V617F阳性者与4例JAK2V617F阴性患者相比较,阳性组的外周血白细胞计数、血小板计数与阴性组相比有显著性差异（P<0.05）。两组性别、年龄、肝脾肿大、外周血白细胞计数、骨髓增生程度、骨髓纤维化、并发症方面均无统计学差异。63例ET患者中JAK2V617F阳性组（39例）与阴性组（24例）相比较,参数包括性别、年龄、肝脾肿大、外周血白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数、骨髓增生程度、骨髓巨核细胞计数、并发症等。结果发现阳性组的外周血白细胞计数、血红蛋白水平以及血栓并发症较阴性组增高且有显著性差异（P=0.004,P<0.05,P=0.015）,其它各项均无统计学差异。27例JAK2V617F阳性的PMF患者与21例JAK2V617F阴性的PMF患者对比,阳性组白细胞计数与阴性组对比升高（P=0.04）,两组性别、年龄、肝脾肿大、血红蛋白水平、血小板计数、骨髓增生程度、骨髓纤维化程度、并发症方面均无统计学差异。结论：（1）本组病例在BCR-ABL阴性的MPD中JAK2V617F突变总体阳性率为68.1%,其中PV 91％,ET 62％,PMF56％；而在BCR-ABL阳性的CML中阳性率为0。（2）JAK2V617F突变在PV、ET和PMF患者中的发生率具有明显差异性,PV患者的突变阳性率显著高于ET和PMF患者。（3）在非典型MPD中,发现了1例CNL患者存在JAK2V617F突变,其意义有待进一步确定。（4）本实验在MDS、CMML及AML患者中各检出1例JAK2V617F阳性患者,而在ALL、CLL及淋巴瘤患者中未检测到该突变,说明JAK2V617F突变仅见于髓系血液肿瘤,在淋系血液肿瘤中不存在该突变。（5）在经典MPD患者中,即PV、ET、PMF患者中JAK2V617F突变阳性组的外周血白细胞计数均较阴性组高。PV患者突变阳性组的血小板计数也较阴性组升高。ET患者突变阳性组除白细胞增多外,血红蛋白水平和发生血栓的几率均较阴性组显著增高。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 研究材料
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 诊断标准
• 2.2 研究试剂
• 2.2.1 试剂盒
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要溶液配制
• 2.2.4 PCR引物
• 2.3 仪器设备
• 2.4 研究方法
• 2.4.1 基因组DNA提取
• 2.4.2 Allele-specific PCR检测JAK2V617F突变
• 2.4.3 琼脂糖凝胶电泳
• 2.4.4 PCR产物纯化及测序
• 2.4.5 患者临床特征分析
• 2.5 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 提取的DNA纯度及含量测定
• 3.2 凝胶电泳分析AS-PCR扩增产物
• 3.3 部分病例JAK2V617F测序结果
• 3.4 AS-PCR检测JAK2V617F阳性率
• 3.5 MPD患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析
• 3.5.1 PV患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析
• 3.5.2 ET患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析
• 3.5.3 PMF患者JAK2V617F基因突变与临床、实验室特征分析
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 第六章 综述
• 参考文献
• 致谢