论文题目: 耐盐产酯酵母的选育
论文类型: 硕士论文
论文专业: 食品科学
作者: 顾金兰
导师: 王昌禄
关键词: 紫外线,氯化锂,耐盐性,单亲灭活原生质体,酱油
文献来源: 天津科技大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）T-27（α,trp-,ura-）为出发菌株,通过紫外线和氯化锂复合诱变选育出一株耐盐突变株T-27-12,并对该突变株进行了遗传特性的初步研究。然后通过原生质体融合技术选育出一株耐盐产酯酵母应用于酱油的小型酿造试验。 以酿酒酵母T-27为出发菌株,通过紫外线和氯化锂复合诱变,得到一株耐盐突变株T-27-12,其耐盐度为16%,比出发菌株提高了60%。分别对耐盐突变株T-27-12的耐盐性产生原因、耐盐突变株的遗传决定子和耐盐基因的显隐性进行了分析和测定。试验表明,耐盐突变株的耐盐特性是由基因突变所产生,并初步确定突变株的耐盐性受核基因控制,且为显性基因控制。 对产酯酵母W的生孢条件进行了研究,最终选定培养基E（E:醋酸钠0.82%,氯化钾0.18%,葡萄糖0.1%,硫酸镁0.02%,琼脂2%,pH=6.0）,采用此生孢培养基生孢最好。 对亲株耐盐酵母T-27-12和产酯酵母单倍体WS原生质体的制备条件和融合条件进行了研究:综合考虑原生质体形成率和再生率,确定原生质体制备条件为:在30℃条件下经β-巯基乙醇预处理,采用Zymolyase酶混合液,对T-27-12菌株最佳的酶浓度为1.5%,酶解时间为60min,产酯酵母WS菌株最佳酶浓度为2%,酶解时间为90min。最佳融合条件:35%的促融剂PEG中添加1.2g/L的CaCl2促融,在30℃条件下,耐盐亲株原生质体与经灭活的产酯酵母原生质体等量恒温融合1h,融合率达到2.76×10-6。通过测定亲株耐盐酵母T-27-12和产酯酵母WS和融合株耐盐产酯酵母TW-6细胞体积和DNA含量等试验结果进一步证明,融合子是经过两亲株原生质体融合并发生遗传物质重组的菌株。 对融合子进行酱油发酵试验,采用高盐稀态20d速酿工艺,添加本论文获得的耐盐产酯酵母TW-6与亲株产酯酵母相比较,酱油中的总酯含量和其主体香气成分乙酸乙酯、4-乙基愈疮木酚的含量没有较大变化;与一般生产上采用的球拟酵母相比较,酱油中的总酯含量有一定提高,总酯从0.34g/100mL提高到了0.46g/100mL。从对产物色谱结果来看,乙酸乙酯的含量也由20.46mg/L提高到28.26mg/L。4-乙基愈疮木酚由2.30mg/L提高到2.86mg/L。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
1、前言
1.1 耐盐酵母的国内外研究进展
1.1.1 酵母的盐胁迫应答的信号传导途径
1.1.2 离子平衡机制
1.1.3 主要渗透保护性物质的合成
1.1.4 盐胁迫下基因组转录应答模式与功能组
1.1.5 酵母中耐盐基因的研究方法
1.1.6 酵母耐盐基因的研究在植物耐盐基因研究中的作用
1.2 酵母菌在酱油生产中的应用
1.3 耐盐产酯酵母的选育方法
1.3.1 诱变育种
1.3.2 原生质体融合法育种
1.4 论文立题依据
1.4.1 对耐盐酵母突变株的研究
1.4.2 酱油工艺的比较和耐盐产酯酵母的作用
1.5 论文的主要研究内容
2、材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌种
2.1.2 主要培养基
2.1.3 主要溶液与试剂
2.1.4 主要实验材料
2.1.5 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 出发菌株酿酒酵母T-27生长曲线的测定
2.2.2 出发菌株酿酒酵母T-27耐盐性考查
2.2.3 诱变育种选育耐盐突变株
2.2.4 突变株菌种的稳定性
2.2.5 耐盐突变株的遗传分析
2.2.6 产酯酵母耐盐性考查
2.2.7 产酯酵母生孢及单倍体分离
2.2.8 耐盐产酯酵母的原生质体融合
2.2.9 融合子发酵试验
3、结果与讨论
3.1 耐盐突变株的选育
3.1.1 出发菌株酿酒酵母T-27生长曲线的绘制
3.1.2 出发菌株酿酒酵母T-27耐盐性考查
3.1.3 致死率曲线的制作
3.1.4 耐盐突变株的筛选
3.1.5 耐盐突变株在不同盐浓度下生长曲线的绘制
3.1.6 耐盐突变株的遗传稳定性考查
3.2 耐盐突变株的遗传分析
3.2.1 耐盐突变株产生原因的分析
3.2.2 耐盐性突变株决定子的测定
3.2.3 确定突变体基因的显隐性鉴定
3.3 产酯酵母单倍体的获得
3.3.1 产酯酵母生孢及单倍体分离
3.3.2 产酯酵母单倍体耐盐性考查
3.4 耐盐产酯酵母菌的原生质体融合
3.4.1 单倍体亲株的生长曲线
3.4.2 原生质体制备条件的确定
3.4.3 产酯酵母原生质体紫外线致死条件的确定
3.4.4 原生质体融合
3.5 融合子发酵实验
4、结论
5、展望
6、参考文献
7、致谢
8、研究生期间发表论文
发布时间: 2007-01-10
参考文献
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