食管癌相关基因2（ECRG2）对肿瘤细胞增殖、迁移和转移的抑制作用

论文题目: 食管癌相关基因2（ECRG2）对肿瘤细胞增殖、迁移和转移的抑制作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 肿瘤学

作者: 黄革

导师: 陆士新

关键词: 基因克隆,原核表达,蛋白纯化,单克隆抗体,生长抑制,软琼脂克隆实验,裸鼠成瘤实验,侵袭转移

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 食管癌相关基因2(Esopageal Cancer Related Gene2，ECRG2)是我室克隆并鉴定的一个新基因。以往的研究表明，ECRG2具备抑癌基因的某些特征，并具有生物学功能。本研究建立了ECRG2蛋白的原核高效表达体系及纯化方法，并应用该方法获得一定数量和纯度的原核重组表达蛋白，同时以人工合成的C-末端多肽作为抗原，制备了单克隆抗体，为后续工作提供了研究基础。此外，构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG2，转染食管癌EC9706细胞。观察发现，转染ECRG2后肿瘤细胞生长缓慢、增殖速度降低、停泊-非依赖能力受到抑制。用原核重组ECRG2蛋白或合成的ECRG2多肽片段在体外处理EC9706细胞，也能够抑制细胞生长，并呈现剂量-效应关系；将处理后的细胞注射到裸鼠皮下，发现形成肿瘤的时间推迟、生长变慢、体积减小、重量减轻。进一步验证了ECRG2对肿瘤细胞的生长抑制，并显示出ECRG2作为分子药物用于肿瘤治疗的潜在价值。 ECRG2属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员，该家族的某些成员能够抑制肿瘤细胞的侵袭和转移，提示ECRG2可能与肿瘤细胞的侵袭转移有关。本研究进一步采用Scrape-healing实验、Transwell迁移实验及裸鼠体内肿瘤转移实验，观察ECRG2对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响，并探索其作用分子机理。结果显示，ECRG2蛋白不仅能够降低大细胞肺癌PG细胞在体外的迁移速度及变形穿越人造膜的能力，而且能够减少裸鼠体内转移灶形成的数量，减轻转移灶内肿瘤细胞的侵袭表型。研究还显示，ECRG2蛋白能够特异性结合细胞外具有活性的uPA，抑制ECM组分的降解，并抑制uPA下游底物MMP2的激活，使MMP2停留在前体状态。提示ECRG2通过参与uPA活性的调节，从而抑制了肿瘤细胞的侵袭与转移。综上所述，ECRG2在体内体外都具备抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等多方面的能力，展现出良好的临床应用前景。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

研究背景

第一部分：ECRG2的原核表达与纯化

第二部分：制备anti-ECRG2单克隆抗体

第三部分：ECRG2对EC9706细胞恶性增殖的抑制作用

第四部分：ECRG2对肿瘤细胞侵袭转移抑制作用及其机理

参考文献

综述

附录

致谢

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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食管癌相关基因2（ECRG2）对肿瘤细胞增殖、迁移和转移的抑制作用

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