新疆马鹿生茸类干细胞的研究

论文摘要

马鹿属国家二级保护野生动物,鹿茸在药用、保健、美容等方面的功效十分显著,产品倍受青睐,是值得开发利用的资源之一。本研究以马鹿鹿茸为实验材料,对其解剖结构和鹿茸骨膜超微结构进行了观察,对生茸类干细胞进行了培养和鉴定,结果如下:1.鹿茸组织胶原纤维丰富,细胞数量少,分布不均匀,种类少,主要位于茸骨骨膜层,细胞呈长梭形,核质比高,核仁明显,个别为双核仁,细胞器少,符合成体干细胞的特征。2.建立了马鹿耳部皮肤成纤维细胞和马鹿生茸类干细胞的培养方法和培养体系。3.鹿茸类干细胞以hDMEM培养液效果较好,采用FCS与NCS 1:2混合培养效果较好,原代培养添加20%血清为宜,传代以10%为宜,添加FGF、雄激素、胰岛素生长因子有助于鹿茸细胞的生长,鹿茸细胞对接种密度较敏感,以106个/毫升为宜,太高或太低易引起细胞衰老和分化。4.鹿茸类干细胞具有贴壁生长特性,在原代培养早期,主要为宽大扁平的成纤维细胞样,生长密集时呈旋涡状或鸟巢状,传至第3代出现衰老,在体外培养条件下,能够自发分化为前成骨细胞和软骨细胞。5.鹿茸细胞采用常规细胞DMSO冻存法复苏贴壁率优于程序式冻胚仪冷冻法、乙二醇常规细胞冻存法。6.建立的鹿茸类干细胞系经AKP染色呈阳性,通过观察培养形态、电镜分析也已证明分离得到鹿茸类干细胞,完全符合干细胞鉴定特征。

论文目录

• 前言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 动物细胞体外培养技术的研究及进展
• 1.1 动物细胞培养的发展历程与研究概况
• 1.2 动物细胞体外培养的主要环节
• 1.2.1 原代培养
• 1.2.2 传代培养
• 1.2.3 细胞的冻存和复苏
• 1.3 单细胞体外分离培养的原理和方法
• 1.3.1 单细胞分离培养的原理
• 1.3.2 单细胞分离培养的方法
• 1.4 影响动物细胞体外培养的主要因素
• 1.4.1 分离方法
• 1.4.2 培养液成份
• 1.4.3 培养液的PH值
• 1.4.4 培养液中的抗菌素
• 1.4.5 培养温度
• 1.4.6 接种的细胞密度和细胞状态
• 1.4.7 气相环境
• 1.4.8 支持物
• 1.5 动物细胞体外培养存在的问题
• 1.6 动物细胞体外培养技术的应用前景
• 第二章 鹿茸研究进展
• 2.1 鹿茸化学成分分析研究的历史
• 2.2 鹿茸的化学成分分类
• 2.2.1 胶质
• 2.2.2 氨基酸类
• 2.2.3 无机元素
• 2.2.4 其它活性成分
• 2.3 鹿茸化学成分的归类
• 2.3.1 从组织学角度归类
• 2.3.2 无法确切归类成分
• 2.4 鹿茸的药理作用及研究
• 2.4.1 心血管系统
• 2.4.2 神经系统
• 2.4.3 对代谢的影响
• 2.4.4 抗氧化作用
• 2.4.5 对性功能的影响
• 2.4.6 对实验性胃溃疡的影响
• 2.4.7 对骨折及创伤愈合的影响
• 2.4.8 抗应激作用
• 2.4.9 对免疫功能的影响
• 2.4.10 其它作用
• 2.5 临床应用
• 2.6 鹿角的开发利用前景
• 2.6.1 制药
• 2.6.2 保健和美容
• 2.6.3 装饰品和天然艺术品
• 2.6.4 高新科技
• 第三章 干细胞可塑性争议及分化假说
• 3.1 可塑性与干细胞分化的传统观点
• 3.2 细胞融合现象
• 3.3 干细胞可塑性与细胞异质性
• 3.4 横向分化现象
• 3.5 存在问题及展望
• 第二部分 试验研究
• 试验一 新疆马鹿耳部皮肤成纤维细胞系的建立
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 试验二 新疆马鹿组织观察及透射电镜分析
• 1. 材料与方法
• 2. 结果及分析
• 3. 结论
• 试验三 新疆马鹿鹿茸细胞的培养、分离
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 试验四 新疆马鹿鹿茸类干细胞的分离鉴定
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 结论与展望
• 一 结论
• 二 存在的问题
• 三 前景与展望
• 参考文献
• 附录
• 附图
• 个人简历
• 致谢
• 导师评阅表