丹七方抗大鼠血小板聚集的蛋白质组学及药动学研究

论文摘要

(1)丹参、三七为治疗心血管疾病的传统中药,二者常配伍应用。为研究其主要活性组分丹参总酚酸和三七总皂苷抑制血小板聚集的活性,分别比较了两类物质单用与合用对SD大鼠离体和在体血小板聚集率的影响。体外实验表明,丹参总酚酸、三七总皂苷均能抑制ADP诱导的大鼠洗涤血小板和富血小板血浆中血小板（PRP）聚集,但无协同效应。以550mg·kg-1连续灌胃给药5d后,丹参总酚酸与三七总皂苷均能显著抑制ADP诱导的大鼠体内富血小板血浆中血小板（PRP）的聚集性,当丹参总酚酸与三七总皂苷的比例为5:1时,协同抗ADP诱导的大鼠体内PRP聚集作用最佳。同时还研究了丹参中作用最强的单体成分丹酚酸B,发现它能显著抑制ADP诱导的大鼠体外洗涤血小板聚集,IC50为67.33±1.22μg·mL-1。（2）为进一步阐明丹参总酚酸、三七总皂苷、丹酚酸B抑制ADP诱导的血小板聚集的作用机制,本实验建立了丹参总酚酸、三七总皂苷、丹酚酸B处理前后血小板总蛋白质的双向电泳图谱,利用MALDI-TOF-MS技术识别并鉴定了两不同组别血小板蛋白质间差异表达蛋白质。这些差异表达蛋白质与钙平衡、血小板激活、细胞跨膜信号转导、物质能量代谢、抗氧化系统及细胞骨架密切相关,并应用免疫印迹法验证了部分差异蛋白质的表达水平。（3）采用HPLC-UV,建立了丹参总酚酸与三七总皂苷合用（5:1）灌胃给药后大鼠血浆中原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B含量同时测定方法,并对其进行药动学研究。色谱柱:Zorbax SB-C18column（250mm×4.6mm,5μm）;流速:1 mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:280nm,以乙腈和0.026%磷酸水溶液梯度洗脱,血浆样品以体积分数为10%的盐酸酸化,而后用乙酸乙酯萃取两次,并根据测定结果求算主要药动学参数。结果,四种成分的日内与日间RSD%均小于15%,提取回收率均大于70%,线性关系良好（r＞0.99）。原儿茶醛在10.0min达峰,Cmax为6.466μg·mL-1,AUC0-240值为82.0μg·min·mL-1,迷迭香酸在11.7min达峰,Cmax为10.50μg·mL-1,AUC0-240值为446.6μg·min·mL-1,紫草酸在20.8min达峰,Cmax为5.950μg·mL-1,AUC0-240值为486.7μg·min·mL-1,丹酚酸B在8.33min达峰,Cmax为48.12μg·mL-1,AUC0-240值为1766μg·min·mL-1。（4）运用HPLC-UV法检测大鼠灌胃给予丹参总酚酸和三七总皂苷（5:1）后5～240min内的11个时间点原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B在各组织脏器中的含量,总结分布差异及特征。研究结果表明,只有原儿茶醛可以在肝、脾、肺、肾组织中被检出,原儿茶醛吸收迅速,于10～30min即达含量的峰值,之后随时间的延长药物含量迅速降低;肺组织中原儿茶醛药时曲线有双峰现象。药物在组织中的含量远低于相同时间的血浆药物浓度。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 蛋白质组学概论
• 1.2 复方中药药动学研究
• 1.3 丹参总酚酸的研究概况
• 1.4 三七总皂苷的研究概况
• 1.5 立题依据与研究思路
• 第二章 抗ADP诱导的大鼠血小板聚集的药理活性
• 2.1 仪器与试药
• 2.2 实验动物
• 2.3 丹酚酸B体外抗洗涤血小板聚集实验
• 2.4 丹参总酚酸体外抗洗涤血小板聚集实验
• 2.5 三七总皂苷体外抗洗涤血小板聚集实验
• 2.6 丹参总酚酸体外抗富血小板血浆中血小板（PRP）的聚集实验
• 2.7 三七总皂苷体外抗富血小板血浆中血小板（PRP）的聚集实验
• 2.8 丹参总酚酸与三七总皂苷配伍抗ADP诱导的大鼠体外洗涤血小板聚集实验
• 2.9 丹参总酚酸与三七总皂苷配伍抗ADP诱导的大鼠体外富血小板血浆中血小板（PRP）的聚集实验
• 2.10 丹参总酚酸与三七总皂苷配伍抗ADP诱导的大鼠体内洗涤血小板聚集实验
• 2.11 丹参总酚酸与三七总皂苷配伍抗ADP诱导的大鼠体内富血小板血浆中血小板（PRP）聚集实验
• 2.12 小结
• 第三章 药物预处理大鼠血小板蛋白质组表达差异及质谱分析
• 3.1 仪器与试药
• 3.2 实验动物
• 3.3 丹酚酸B预处理大鼠血小板蛋白质组表达差异及质谱分析
• 3.4 丹参总酚酸预处理大鼠血小板蛋白质组表达差异及质谱分析
• 3.5 三七总皂苷预处理大鼠血小板蛋白质组表达差异及质谱分析
• 第四章 丹参总酚酸与三七总皂苷合用四种丹酚酸成分在大鼠体内的药动学研究
• 4.1 仪器与试药
• 4.2 实验动物
• 4.3 液相色谱条件
• 4.4 血浆样品预处理
• 4.5 分析方法验证
• 4.6 药物动力学研究
• 4.7 小结
• 第五章 丹参总酚酸与三七总皂苷合用四种丹酚酸成分在大鼠组织分布初步研究
• 5.1 仪器与试药
• 5.2 实验动物
• 5.3 组织样品的采集
• 5.4 组织样品预处理
• 5.5 液相色谱条件
• 5.6 溶液的配制
• 5.7 标准工作曲线的绘制
• 5.8 实验结果
• 5.9 小结
• 第六章 结果与讨论
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢